基于BmNPV da26与gp64基因融合表达L-天冬酰胺酶Ⅱ的抗肿瘤药物构建与性能研究.docxVIP

基于BmNPVda26与gp64基因融合表达L-天冬酰胺酶Ⅱ的抗肿瘤药物构建与性能研究

一、引言

1.1研究背景

家蚕杆状病毒（Bombyxmorinucleopolyhedrovirus，BmNPV）作为杆状病毒科的典型成员，是一种双链DNA病毒，在昆虫细胞内具有独特的生命周期和感染特性，其基因结构和功能的研究一直是病毒学领域的热点。BmNPV的da26基因编码的蛋白（BV/ODV-E26）是一种重要的包膜蛋白，不仅参与病毒粒子的组装过程，还在病毒感染宿主细胞的机制中发挥关键作用，能够包被于多角体的外膜表面，这一特性为外源基因的融合表达提供了新的思路。

L-天冬酰胺酶Ⅱ（L-asparagineenzymeII，L-ASP）是一种在临床上具有重要应用价值的酰氨基水解酶类药物。其主要作用机制是特异性地催化L-天冬酰胺水解，生成L-天冬氨酸和氨。对于某些肿瘤细胞而言，由于缺乏L-天门冬酰胺合成酶，它们依赖外源的L-天冬酰胺来进行蛋白质合成，L-ASP对天冬酰胺的降解作用切断了肿瘤细胞的这一营养来源，从而导致肿瘤细胞因无法合成蛋白质而死亡。尤其是在儿童急性淋巴细胞白血病的治疗中，L-ASP发挥着不可替代的作用，成为联合化疗方案中的重要组成部分。

目前，市场上的L-ASP产品主要通过大肠杆菌发酵生产。然而，这种生产方式存在诸多弊端，大肠杆菌本身是一种细菌，在生产过程中容易污染内毒素，内毒素进入人体后可能引发发热、休克等严重的不良反应，给患者的治疗带来安全隐患；大肠杆菌表达系统在蛋白质折叠和修饰方面存在一定局限性，可能导致表达的L-ASP蛋白结构不够稳定，活性受到影响。因此，寻找一种更为安全、高效的L-ASP表达系统迫在眉睫。

杆状病毒表达系统以其安全性高、表达量高、能进行正确的蛋白质折叠和修饰等优势，逐渐成为生物制药领域的研究热点。利用BmNPV的da26基因和gp64基因与L-ASP进行融合表达，有望构建出一种新型的、高效的L-ASP表达体系。da26基因可使融合表达的外源蛋白结合于病毒颗粒，便于后续的分离纯化；gp64基因作为杆状病毒核型多角体病毒组I的主要囊膜糖蛋白，能够在病毒粒子表面展示外源蛋白，为开发新型抗肿瘤药物提供了新的策略。在这样的背景下，开展BmNPVda26基因及gp64融合表达抗肿瘤药物L-天冬酰胺酶Ⅱ的研究具有重要的理论和实践意义。

1.2研究目的与意义

本研究旨在利用家蚕杆状病毒（BmNPV）的da26基因和gp64基因，构建高效的L-天冬酰胺酶Ⅱ（L-ASP）融合表达体系，深入探究融合表达的L-ASP的生物学活性及其抗肿瘤潜力。通过基因重组技术，将L-ASP基因与da26基因、gp64基因进行融合，分别构建重组转移质粒，并获得重组家蚕杆状病毒。利用家蚕细胞或虫体作为生物反应器，实现L-ASP的高效表达，并对表达产物进行分离、纯化和活性鉴定。

在肿瘤治疗领域，L-ASP作为一种重要的抗肿瘤药物，其疗效和安全性一直备受关注。目前大肠杆菌生产的L-ASP存在内毒素污染等问题，限制了其临床应用。本研究若能成功构建基于BmNPV的L-ASP融合表达体系，将有望解决现有生产方式的不足，为临床提供更加安全、有效的L-ASP药物。新型的融合表达策略可能赋予L-ASP更好的生物学活性和肿瘤靶向性，为肿瘤治疗开辟新的途径。

从生物制药的角度来看，杆状病毒表达系统具有广阔的应用前景。通过本研究，可以进一步拓展杆状病毒表达系统在生产药用蛋白方面的应用范围，优化表达和纯化工艺，提高生产效率和产品质量。这不仅有助于推动生物制药产业的发展，还能为其他药用蛋白的生产提供借鉴和参考，促进整个生物技术领域的进步。

1.3国内外研究现状

在BmNPV基因研究方面，国内外学者已经对其基因组进行了全面测序和分析，明确了众多基因的功能和调控机制。对于da26基因，研究发现其编码的BV/ODV-E26蛋白在病毒感染和传播过程中起着关键作用，参与了病毒粒子的组装和释放。在利用da26基因进行外源蛋白表达方面，已有一些尝试，如将某些报告基因与da26基因融合，实现了外源蛋白在病毒粒子表面的展示，但在药用蛋白表达方面的研究还相对较少。

关于L-天冬酰胺酶Ⅱ，自从发现其抗肿瘤活性以来，一直是研究的热点。在生产方面，大肠杆菌发酵生产L-ASP的工艺已经相对成熟，但如前文所述，存在内毒素污染等问题。为了解决这些问题，国内外学者尝试了多种方法，包括对大肠杆菌进行基因工程改造，降低内毒素的产生；采用新型的分离纯化