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水稻OsFTL11基因功能的初步研究

摘要

FT（FLOWERINGLOCUST）是高等植物中控制开花的关键基因，即开花素基因。水稻中有13个FT同源基因，其中除对Hd3a和RFT1研究较详细，确认其在植物开花中的重要作用外，对其它成员的功能研究相对较少。本论文对水稻OsFTL11基因的功能进行了初步研究，主要研究结果如下：

构建了4个双元表达载体：pFTL11::FTL11:GUS:GFP；pFTL11::FTL11:GFP；p35S::FTL11:GUS:GFP；p35S::FTL11:GFP。分别用于研究水稻OsFTL11基因的表达模式、超表达功能、以及其蛋白移动与否对植物生长及开花产生的影响。

将以上4种载体分别转化了水稻、烟草、拟南芥；并通过PCR扩增、Southern杂交、GUS染色进行了鉴定，实验结果表明成功获得了相应的转化株系。

对OsFTL11基因的表达模式进行了研究分析，结果表明其在三种转基因植物的根的中柱、叶片的叶脉、茎段都有一定的表达量。另外，OsFTL11基因在三种转基因植物的根中表达存在差异：在烟草和拟南芥中，OsFTL11基因在幼根中不表达，在成熟根的中柱表达，而水稻无论是幼根还是成熟根，均可检测到其有一定的表达量。

对三种转基因植物进行表型分析得出以下结果：

在T0代转基因水稻中，转p35S::FTL11:GFP株系表型较野生型高，且分蘖多；转pFTL11::FTL11:GFP、p35S::FTL11:GUS:GFP株系的表型较野生型矮、弱；转pFTL11::FTL11:GUS:GFP植株与野生型相比无明显差异。

在T0代转基因烟草中，转p35S::FTL11:GUS:GFP、p35S::FTL11:GFP株系与野生型相比无明显差异；转pFTL11::FTL11:GUS:GFP、pFTL11::FTL11:GFP株系表型较野生型矮、弱，且叶片发黄。

在T0代转基因拟南芥中，转p35S::FTL11:GUS:GFP、p35S::FTL11:GFP株系较野生型开花晚；转pFTL11::FTL11:GUS:GFP、pFTL11::FTL11:GFP株系较野生型开花早。

关键词

水稻；OsFTL11基因；载体构建；表达模式；表型分析

一、引言

开花是高等植物从营养生长向生殖生长转变的重要过程，受到遗传和环境因素的精确调控。FT基因作为开花途径的关键整合因子，编码的成花素蛋白能够从叶片移动到茎尖分生组织，与bZIP转录因子FD相互作用，激活花分生组织特性基因，从而促进植物开花。水稻作为重要的粮食作物和单子叶模式植物，其FT家族包含13个成员。目前，对水稻FT家族中的Hd3a和RFT1研究较为深入，它们分别在短日照和长日照条件下作为主要的成花素促进水稻抽穗。然而，对于其他FT同源基因，如OsFTL11，其功能研究相对匮乏。深入探究OsFTL11基因的功能，不仅有助于全面解析水稻开花调控网络，还可能为水稻遗传改良和分子育种提供新的基因资源和理论依据。

二、材料与方法

2.1实验材料

植物材料：本研究选用水稻品种日本晴（OryzasativaL.ssp.japonicacv.Nipponbare）、烟草品种本生烟（Nicotianabenthamiana）以及拟南芥生态型哥伦比亚（ArabidopsisthalianaecotypeColumbia）作为实验材料。这些植物材料在各自适宜的生长条件下培养，水稻种植于温室，温度控制在28℃左右，光照周期为14小时光照/10小时黑暗；烟草和拟南芥种植于人工气候箱，温度22℃，光照周期16小时光照/8小时黑暗。

菌株与载体：大肠杆菌菌株DH5α用于质粒扩增，农杆菌菌株EHA105用于植物遗传转化。实验中使用的双元表达载体包括pCAMBIA1300系列改造载体，如pFTL11::FTL11:GUS:GFP、pFTL11::FTL11:GFP、p35S::FTL11:GUS:GFP、p35S::FTL11:GFP，这些载体用于研究水稻OsFTL11基因的表达模式、超表达功能以及蛋白移动特性。

2.2实验方法

载体构建：以水稻日本晴基因组DNA为模板，通过PCR扩增获得OsFTL11基因的启动子序列和编码区序列。利用限制性内切酶和DNA连接酶，将扩增片段与含有GUS、GFP报告基因的pCAMBIA1300载体进行连接，构建出4个双元表达载体。具体构建过程经过酶切验证、PCR鉴定以及测序分析，确保载体构建的准确性。

植物转化：采用农杆菌介导的遗传转