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PCR检测操作要素多选试题库及答案

单项选择题（每题2分，共10题）

1.PCR反应中，Taq酶的作用是（）

A.解旋DNA

B.合成引物

C.催化DNA合成

D.水解DNA

答案：C

2.PCR反应的第一步是（）

A.退火

B.延伸

C.变性

D.循环

答案：C

3.以下哪种物质不是PCR反应必需的（）

A.模板DNA

B.引物

C.限制性内切酶

D.dNTP

答案：C

4.PCR反应中引物的作用是（）

A.提供合成起点

B.解旋DNA

C.催化反应

D.标记DNA

答案：A

5.常用的PCR仪是利用什么原理工作的（）

A.电磁感应

B.热传导

C.超声波

D.微波

答案：B

6.PCR反应中，延伸温度一般设置为（）

A.94℃

B.55℃

C.72℃

D.37℃

答案：C

7.用于PCR的模板DNA可以来源于（）

A.细胞

B.病毒

C.组织

D.以上都是

答案：D

8.PCR反应中，dNTP的作用是（）

A.提供能量

B.作为合成DNA的原料

C.调节pH

D.稳定酶活性

答案：B

9.引物设计时，其长度一般为（）

A.5-10bp

B.15-30bp

C.30-50bp

D.50-100bp

答案：B

10.PCR反应中，退火温度取决于（）

A.引物长度

B.引物GC含量

C.模板DNA浓度

D.A和B

答案：D

多项选择题（每题2分，共10题）

1.PCR反应体系的基本成分包括（）

A.模板DNA

B.引物

C.Taq酶

D.dNTP

答案：ABCD

2.PCR反应的三个基本步骤是（）

A.变性

B.退火

C.延伸

D.循环

答案：ABC

3.影响PCR反应的因素有（）

A.引物质量

B.模板纯度

C.反应温度

D.镁离子浓度

答案：ABCD

4.引物设计的原则包括（）

A.长度合适

B.GC含量适中

C.避免形成二级结构

D.特异性强

答案：ABCD

5.PCR技术可应用于（）

A.基因克隆

B.疾病诊断

C.亲子鉴定

D.物种鉴定

答案：ABCD

6.PCR反应中，可能导致非特异性扩增的原因有（）

A.引物特异性差

B.退火温度过低

C.模板DNA不纯

D.Taq酶浓度过高

答案：ABCD

7.提高PCR反应特异性的方法有（）

A.优化引物设计

B.提高退火温度

C.减少模板用量

D.使用热启动Taq酶

答案：ABD

8.PCR反应中，镁离子的作用有（）

A.激活Taq酶

B.影响引物与模板的结合

C.影响dNTP与模板的结合

D.稳定DNA结构

答案：ABC

9.以下关于PCR技术的描述，正确的是（）

A.可在体外快速扩增特定DNA片段

B.具有高度特异性

C.灵敏度高

D.可用于检测微量DNA

答案：ABCD

10.PCR产物的检测方法有（）

A.琼脂糖凝胶电泳

B.聚丙烯酰胺凝胶电泳

C.测序

D.荧光定量检测

答案：ABCD

判断题（每题2分，共10题）

1.PCR反应中，模板DNA可以是双链DNA也可以是单链DNA。（）

答案：√

2.PCR反应中，退火温度越高，引物与模板结合越稳定。（）

答案：×

3.Taq酶具有3-5外切酶活性。（）

答案：×

4.PCR反应中，dNTP浓度越高，反应效果越好。（）

答案：×

5.引物的3端碱基对PCR反应的特异性影响较大。（）

答案：√

6.PCR反应可以在常温下进行。（）

答案：×

7.模板DNA的浓度对PCR反应没有影响。（）

答案：×

8.PCR技术只能扩增已知序列的DNA片段。（）

答案：√

9.荧光定量PCR可以对PCR产物进行定量分析。（）

答案：√

10.PCR反应中，循环次数越多，产物量就越多。（）

答案：×

简答题（每题5分，共4题）

1.简述PCR技术的基本原理。

答案：PCR技术是在体外模拟DNA体内复制过程。通过高温使模板DNA变性解链，低温让引物与模板退火结合，适温下Taq酶催化dNTP沿引物延伸合成新DNA链，经多次循环实现特定DNA片段大量扩增。

2.简述引物设计的基本要求。

答案：引物长度15-30bp为宜，GC含量40%-60%，避免自身或引物间形成二级结构，3端碱基要与模板严格配对，且特异性强，避免与非目标序列结合。

3.影响PCR反应特异性的因素有哪些？

答案：包括引物特异性、退火温度、模板纯度、镁离子浓度等。引物设计不佳易引发非特异性结合；退火温度低会使引物错配；模板不纯含杂质干扰；镁离子浓度不当影响酶活性和结合。

4.简述PCR产物的常见检测方法。

答案：常见检测方法有琼脂糖凝胶电泳，可观察产物大小和有无；聚丙烯酰胺凝胶电泳分辨率更高；测序能确定产物序列；荧光定量检测可对产物定量分析。

讨论题（每题5分，共4题）

1.讨论PCR技术在疾病诊断中的应用前景。

答案：PCR技术灵敏度高、特异性强，能快速检测病原体基因，用于传染