PCR培训班考试题.docxVIP

考试对象：本期PCR技术培训班全体学员

考试时间：90分钟

总分：100分

注意事项：

1.请用黑色签字笔在答题卡指定区域作答，字迹清晰。

2.答案需简明扼要，专业术语使用规范。

3.涉及实验操作的问题，请结合理论知识与实际操作经验作答。

一、单项选择题（每题2分，共20分）

1.下列关于PCR技术基本原理的描述，错误的是（）

A.基于DNA半保留复制的特性

B.反应过程包括变性、退火、延伸三个阶段

C.需依赖RNA聚合酶催化核苷酸聚合

D.扩增产物以指数形式增长

2.PCR反应体系中，Mg2?的主要作用是（）

A.维持反应体系pH稳定

B.促进DNA模板变性

C.作为DNA聚合酶的辅因子

D.提高引物与模板的结合效率

3.关于引物设计原则，下列说法正确的是（）

A.引物长度通常为8-15个核苷酸

B.两条引物的Tm值差异应控制在5℃以内

C.引物3端可包含连续的相同碱基

D.引物自身不应形成二级结构

4.实时荧光定量PCR（qPCR）与常规PCR的主要区别在于（）

A.无需DNA聚合酶

B.可实时监测扩增产物积累过程

C.不需要引物参与

D.反应温度恒定

5.PCR反应中，退火步骤的主要目的是（）

A.使DNA双链解旋为单链

B.使引物与模板DNA特异性结合

C.合成新的DNA链

D.终止酶促反应

6.下列哪种情况可能导致PCR产物出现非特异性条带？（）

A.退火温度过高

B.引物浓度过低

C.模板DNA纯度不足

D.延伸时间过短

7.在PCR产物琼脂糖凝胶电泳中，若出现拖尾现象，最可能的原因是（）

A.DNA上样量过多

B.电泳缓冲液浓度过高

C.凝胶浓度过低

D.电压设置过低

8.关于反转录PCR（RT-PCR），下列说法错误的是（）

A.需先将RNA逆转录为cDNA

B.可用于检测基因表达水平

C.逆转录酶需依赖DNA模板

D.常用oligo(dT)或随机引物引发逆转录

9.PCR实验室分区的核心目的是（）

A.提高实验效率

B.防止交叉污染

C.便于仪器管理

D.符合消防安全要求

10.下列哪种物质不是PCR反应的必需组分？（）

A.dNTPs

B.二硫苏糖醇（DTT）

C.DNA聚合酶

D.模板DNA

二、多项选择题（每题3分，共15分；多选、错选、漏选均不得分）

1.影响PCR扩增效率的关键因素包括（）

A.引物特异性

B.退火温度

C.循环次数

D.模板DNA的完整性

2.PCR产物污染的主要来源有（）

A.前次实验残留的扩增产物

B.实验人员操作时的气溶胶

C.未灭菌的离心管

D.引物二聚体

3.关于TaqDNA聚合酶的特性，正确的有（）

A.具有5→3DNA聚合酶活性

B.具有3→5核酸外切酶活性

C.耐高温

D.需在低温下保存

4.可用于验证PCR产物特异性的方法有（）

A.琼脂糖凝胶电泳

B.核酸序列测定

C.限制性内切酶酶切分析

D.熔解曲线分析

5.荧光定量PCR中常用的荧光标记策略包括（）

A.SYBRGreenI染料法

B.TaqMan探针法

C.分子信标探针法

D.放射性同位素标记法

三、简答题（每题8分，共40分）

1.请简述PCR反应中变性-退火-延伸三个步骤的温度设置依据及各自的生物学意义。

2.引物二聚体是PCR实验中常见的干扰因素，请说明其形成原因及如何通过实验设计减少引物二聚体的产生。

3.简述实时荧光定量PCR中Ct值的定义及其与模板初始浓度的关系。

4.当PCR扩增后无产物条带时，从模板、引物、酶、反应条件四个方面分析可能的原因。

5.简述PCR实验室试剂准备区与产物分析区的操作规范差异。

四、实验设计与分析题（共25分）

背景：某实验室拟通过PCR方法检测临床样本中某病毒的特异性基因片段（长度约500bp）。已知该基因片段的部分序列如下（5→3）：

正向链：ATGCGTACGGTACGATCGATCGATCG

反向链：CGATCGATCGATCGATCGATCGATCG

1.请设计一对特异性引物（要求：长度18-22nt，GC含量40%-60%，避免二级结构），并写出引物序列及设计依据。（1