2026届高三生物二轮复习课件：专题八　必备整合3　基因工程及其应用.pptxVIP

大二轮专题复习;;1.基因工程的三种基本工具;2.基因工程的基本操作程序;;3.限制酶的选择技巧

(1)根据目的基因两端的限制酶切点选择限制酶

①应选择切点位于目的基因两端的限制酶，不能选择切点位于目的基因内部的限制酶，如图甲不能选择限制酶SmaⅠ。

②为避免目的基因和质粒的自身环化和反向连接，也可使用不同的限制酶切割目的基因和质粒，如图甲可选择PstⅠ和EcoRⅠ两种限制酶(但要确保质粒上也能被切出相同的黏性末端，如图乙)。;(2)根据质粒的特点选择限制酶(如图);(3)根据Ti质粒的T－DNA片段选择限制酶。图中甲、乙、丁Ti质粒均不宜选取，而丙Ti质粒宜选取(假设切割目的基因的限制酶为XbaⅠ和SacⅠ)。;4.蛋白质工程;5.DNA的粗提取与鉴定;1.(2025·山东，25)种子休眠是抵御穗发芽的一种机制。通过对Ti质粒的改造，利用农杆菌转化法将Ti质粒上的T－DNA随机整合到小麦基因组中，筛选到2个种子休眠相关基因的插入失活纯合突变体。与野生型相比，突变体种子的萌发率降低。小麦基因组序列信息已知。;(1)Ti质粒上与其在农杆菌中的复制能力相关的结构为__________。选用图甲中的SmaⅠ对抗除草剂基因X进行完全酶切，再选择SmaⅠ和_______对Ti质粒进行完全酶切，将产生的黏性末端补平，补平时使用的酶是___________。利用DNA连接酶将酶切后的包含抗除草剂基因X的片段与酶切并补平的Ti质粒进行连接，构建重组载体，转化大肠杆菌；经卡那霉素筛选并提取质粒后再选用限制酶_____________进行完全酶切并电泳检测，若电泳结果呈现一长一短2条带，较短的条带长度近似为_____bp，则一定为正向重组质粒。;Ti质粒和普通质粒一样，具有复制原点，与其在宿主中的复制能力密切相关。选择载体上的酶切位点，首先BamHⅠ不能选，因为涉及终止子序列被切开；其次，能与SmaⅠ组合的只剩下XbaⅠ和PstⅠ，这两个限制酶能切出黏性末端；第三，涉及要补平黏性末端，只有XbaⅠ切出的黏性末端(5′端突出的末端)可以作为模板，在DNA聚合酶的催化下，从其互补链的3′端开始连接脱氧核苷酸补平黏性末端，如图1所示；而PstⅠ切出的黏性末端是3′端突出的末端，无法作为模板，无法从其互补链的5′端??始连接脱氧核苷酸，如图2所示。;首先，补平的载体和SmaⅠ切割的抗除草剂基因X既可以正向连接也可以反向连接；其次，SmaⅠ切出的平末端和补平的XbaⅠ的黏性末端连接后形成的重组位点，两个限制酶识别序列消失，另一边2个SmaⅠ位点连接后形成的重组位点仍然能保留该酶切位点；第三，能切出较准确片段的只剩下SmaⅠ和目的基因内的SpeⅠ两个酶切位点；第四，在进行目的基因和载体连接过程中，由于使用了单酶切，因此，存在载体自连、载体串联、载体和单一基因连接及载体和串联基因连接等情况，但无论何种连接方式，只有单基因和单载体的连接片段在SmaⅠ和SpeⅠ切割下能出现一长一短两条带，且短的条带约为550bp才是正向连接(图3)，而反向连接的片段切出的较短条带是200bp(图4)。;(2)为证明这两个突变体是由于T－DNA插入到小麦基因组中同一基因导致的，提取基因组DNA，经酶切后产生含有T－DNA的基因组片段(图乙)。在此酶切过程中，限于后续PCR难以扩增大片段DNA，最好使用识别序列为____(填“4”“6”或“8”)个碱基对的限制酶，且T－DNA中应不含该酶的酶切位点。需首先将图乙的片段________________，才能利用引物P1和P2成功扩增未知序列。PCR扩增出未知序列后，进行了一系列操作，其中可以判断出2条片段的未知序列是否属于同一个基因的操作为_______________(填“琼脂糖凝胶电泳”或“测序和序列比对”)。;PCR扩增的目标片段大小限制以及扩增的区域是两个引物之间的限定片段。根据题意，一方面要求限制酶能在基因组中切割更多更小的片段，识别序列长度为4、6、8个碱;(3)通过农杆菌转化法将构建的含有野生型基因的表达载体转入突变植株，如果检测到野生型基因，________(填“能”或“不能”)确定该植株的表型为野生型。;2.(2025·湖南，21)非洲猪瘟病毒是一种双链DNA病毒，可引起急性猪传染病。基因A编码该病毒的主要结构蛋白A，其在病毒侵入宿主细胞和诱导机体免疫应答过程中发挥重要作用。回答下列问题：

(1)制备特定抗原

①获取基因A，构建重组质粒(该质粒的部分结构如图所示)。重组质粒的必备元件包括目的基因、限制酶切割位点、标记基因、启动子和_______

____________等；为确定基因A已连接到质粒中且插入方向正确，应选用图中的一对引物________对待测质粒进行PCR扩增，预期扩增产物的片段大小为_