《青海毛肉兼用多胎细毛羊多基因选育技术规程》DB63T 2497-2026.docxVIP

ICS65.020.30CCSB43

DB63

青海省地方标准

DB63/T2497—2026

青海毛肉兼用多胎细毛羊多基因选育技术规程

2026-01-09发布2026-02-10实施

青海省市场监督管理局发布

DB63/T2497—2026

I

前

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则

言

第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定

起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由青海省农牧业标准化技术委员会提出。

本文件由青海省农业农村厅归口。

本文件起草单位：中国科学院西北高原生物研究所、青海省种羊繁育推广服务中心。

本文件主要起草人：田得红、裴全帮、张子安、赵凯、韩步鹰、李雪。

本文件由青海省农业农村厅监督实施。

DB63/T2497—2026

1

青海毛肉兼用多胎细毛羊多基因选育技术规程

1范围

本文件确立了青海毛肉兼用多胎细毛羊多基因选育技术程序，规定了基因判型、选种、基因型选配及选育档案建立等操作步骤的指示，描述了多胎基因型种羊选育技术的追溯方法。

本文件适用于青海毛肉兼用细毛羊多胎个体的分子标记选育。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

GB/T31016样品采集与处理移动实验室通用技术规范

GB/T34265Sanger法测序技术指南

NY/T1673畜禽微卫星DNA遗传多样性检测技术规程

DB63/TDB63/T

DB63/TDB63/T

1036

1606

1876

2249

青海毛肉兼用细毛羊

藏羊细管冻精人工授精技术规程藏羊采精技术操作规程

青海藏羊种畜场档案管理技术规范

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

引物

用于DNA片段聚合酶链式反应扩增人工合成的一种具有特定的核苷酸序列。

基因型

某一生物个体全部基因组合的总称。

4选育技术流程

选育技术流程包括仪器设备、试剂及引物准备、样品采集、DNA提取、PCR扩增、上机测序、数据分析、基因判型、选种、基因型选配等过程。技术流程见图1。

2

DB63/T2497—2026

仪器设备、试剂及引物准备

仪器设备、试剂及引物准备样品采集DNA提取PCR扩增

上机测序

数据分析

推广应用

未选留淘汰出栏

选留基因型种羊

外貌特征

初生

断奶

周岁

基因判型

选种

成年

基因型选配

图1青海毛肉兼用多胎细毛羊多基因选育技术流程图

5技术操作步骤

5.1仪器设备、试剂及引物准备

5.1.1仪器设备

凝胶成像分析系统，高速冷冻离心机，96孔核酸提取仪，超微量分光光度计，电泳槽和电泳仪，电子天平，-20℃冰箱，水平摇床，单道可调移液器，测序仪，PCR仪，微波炉，干燥箱，高压灭菌锅。

5.1.2试剂与耗材

磁珠法基因组DNA提取试剂盒，96孔PCR板，POP-7MPolymer,3730RunningBuffer(10X),Tris碱，乙二胺四乙酸二钠，硼酸，NaOH,ddH?O,NaCl,EDTA,SDS,氯仿：异戊醇(24:1),酚：氯仿：异戊醇(25:24:1),无水乙醇，70%无水乙醇，蛋白酶K,TE缓冲液，PBS,AgNO3,琼脂糖，超纯水，尿素，溴化乙锭，聚丙烯酰胺凝胶，TEMED,AP,过硫酸铵，甲醛，乙酸。

5.1.3溶液配制

实验用水和溶液配制方法按照GB/T6682执行，具体配制方法见附录B。

5.1.4引物序列

引物序列如下：

——FecB-F1:AAAAGGTCGCTATGGGGAAG

——FecB-R1:CTAGGGTGGTGGACTTCAGG

DB63/T2497—2026

3

——GDF9-F2:GAATTGAACCTAGCCCACCC

——GDF9-R2:GCTAACCTCCAGCAGCACTC

5.2样品采集

采集一月龄内待测羔羊的血液或耳组织，样本采集按照GB/T31016的要求执行。

5.3DNA提取

DNA提取和检测按照NY/T1673要求执行。

5.4PCR扩增

利用PCR仪进行PCR扩增，PCR反应体系为30μL,DNA模板：1.0μL,2×TaqP