近红外光谱技术在玉米单倍体籽粒鉴别中的关键技术探索与突破.docxVIP

近红外光谱技术在玉米单倍体籽粒鉴别中的关键技术探索与突破

一、引言

1.1研究背景与意义

玉米作为全球重要的粮食、饲料和工业原料作物，其产量和品质对农业经济和社会发展至关重要。在玉米育种领域，单倍体育种技术凭借显著缩短育种周期、提高育种效率等优势，成为现代玉米育种的关键技术之一。传统的玉米育种方法通常需要经过多代自交才能获得纯合自交系，一般需要8个世代以上连续自交，这一过程不仅耗时漫长，而且工作量巨大。而单倍体育种技术的出现，为玉米育种带来了革命性的变革。通过单倍体育种，只需2个世代即可获得育种所需纯系，极大地加快了育种进程，让玉米育种跑出了“加速度”。

在单倍体育种技术中，准确鉴别玉米单倍体籽粒是整个流程的关键环节。这是因为单倍体籽粒在自然状态下产生的概率极低，在未加人工干预时，单倍体在混合籽粒中仅占0.05%-0.1%，即使采用生物诱导技术，单倍体籽粒数一般也不到籽粒总数的10%。从大量的混合籽粒中精准地挑选出单倍体籽粒，犹如大海捞针，而这却是实现单倍体育种的前提条件。只有准确鉴别出单倍体籽粒，后续对其进行染色体加倍处理，才能获得遗传上纯合的纯系（即双单倍体系，或DH），进而应用于杂交种的培育。如果单倍体籽粒鉴别不准确，可能会导致将非单倍体籽粒误判为单倍体，从而在后续的育种过程中浪费大量的时间和资源，影响育种效率和效果。

近红外光谱技术作为一种快速、无损的分析技术，在农产品品质检测、成分分析等领域展现出了巨大的潜力和优势。其原理是利用近红外光与物质分子的振动和转动能级相互作用产生的吸收光谱，来获取物质的化学组成和结构信息。在玉米单倍体籽粒鉴别方面，近红外光谱技术具有独特的应用价值。与传统的鉴别方法相比，如形态学方法、细胞解剖学方法、遗传标记法等，近红外光谱技术具有检测速度快、无需对样品进行复杂预处理、可实现无损检测等优点。传统的形态学方法需要通过观察植株的形态特征，如植株细弱、高度只有二倍体植株70%等特点来鉴别单倍体，但这种方法主观性较强，且容易受到环境因素的影响；细胞解剖学方法，如染色体计数法，虽然准确性高，但操作复杂、耗时费力，且需要专业的技术人员和设备；遗传标记法需要对籽粒进行基因检测，成本较高，且检测过程较为繁琐。而近红外光谱技术可以在短时间内对大量的玉米籽粒进行快速检测，能够满足工程化育种中对单倍体籽粒高通量筛选的需求。通过建立准确的近红外光谱鉴别模型，可以实现对玉米单倍体籽粒的快速、准确鉴别，为单倍体育种技术的大规模应用提供有力的技术支持，从而推动玉米育种技术的发展和创新，提高玉米的产量和品质，保障国家粮食安全。

1.2国内外研究现状

在玉米单倍体籽粒鉴别领域，国内外学者开展了广泛而深入的研究，取得了一系列重要成果。早期，研究主要集中在一些传统的鉴别方法上。形态学方法是较为基础的一种鉴别手段，通过观察玉米植株或籽粒的形态特征来判断是否为单倍体。例如，单倍体植株通常表现出细弱的形态，其高度大约只有二倍体植株的70%，但这种方法受环境因素影响较大，准确性相对较低。细胞解剖学方法，如染色体计数法，能够直接确定染色体倍性，是确定染色体倍性的基本方法之一，但该方法操作复杂，需要专业的技术和设备，且对样本有一定的破坏性，难以实现大规模的快速检测。

随着研究的不断深入，遗传标记法逐渐成为常用的鉴别方法。1966年，Nanda和Chase将R1-nj标记导入诱导系Stock6，使籽粒顶部糊粉层和胚盾片同时具有显性颜色标记，通过颜色标记在籽粒中的表达，方便了单倍体的早期鉴别。这种方法在一定程度上提高了鉴别效率，但对于颜色标记不明显或受环境影响的情况，仍存在鉴别不准确的问题。2003年，中国农业大学的陈绍江等发现利用高油型诱导系为父本与普通玉米杂交后，母本杂交当代籽粒油分显著高于单倍体籽粒，利用这一方法筛选单倍体准确率可达90%以上，并据此提出基于油分花粉直感效应鉴别单倍体的理论。德国的Melchinger等也在研究中证实了这一理论的有效性。基于此理论，刘金等开发出一套通过油分自动化鉴别单倍体的系统，实现了单倍体鉴别从人工到自动的跨越式发展。

近年来，随着科技的飞速发展，无损检测自动化分选技术成为研究热点，其中近红外光谱技术在玉米单倍体籽粒鉴别中的应用研究取得了显著进展。2009年，陈绍江等提出可以利用近红外光谱分析的方法进行玉米单倍体鉴别，采用近红外光谱结合化学计量学的方法对玉米单倍体进行定性分析，能够更加准确地反映单倍体与杂合二倍体在物理特性上的区别，对于开发自动化的近红外光谱仪器实现快速准确鉴别单倍体具有重要现实意义。Jones等通过对三个玉米杂交种的单倍体与杂合二倍体的近红外光谱进行分析，发现除P1-102外其余品种的单倍体均能实现100