免疫沉淀试验.pptVIP

双向免疫扩散+电泳技术（负极）抗原等电点低，带较强的负电荷，分子量小，在电场中向正极移动（正极）抗体等电点偏高，带负电荷较少，且分子量较大，在电渗作用下，抗体移向负极抗原抗体浓度最适比处形成沉淀线比双向免疫扩散法灵敏度提高8倍～16倍第三节凝胶内沉淀试验（一）对流免疫电泳

原理：第30页，共47页。（一）对流免疫电泳结果分析：1.无沉淀线出现说明无相应的抗原2.沉淀线出现于抗原抗体孔中间，说明两者比例适合3.沉淀线接近抗原孔，表明抗体浓度＞抗原，反之，则是抗体浓度＜抗原浓度对流免疫电泳结果图第三节凝胶内沉淀试验第31页，共47页。（二）火箭免疫电泳单向免疫扩散与电泳相结合的定量检测技术原理：将抗体混合于琼脂中，电泳时，抗体不移动，抗原由负极向正极泳动，并随抗原浓度的减少，抗原泳动的基底区也逐渐变窄，抗原抗体免疫复合物形成的沉淀线也越来越窄，形成一个火箭状的不溶性复合物沉淀峰。当琼脂中的抗体浓度保持不变时，沉淀峰的高度与抗原量呈正比例关系，用已知浓度标准抗原作对照，制作标准曲线，即可根据沉淀峰的高度从标准曲线中计算出待测抗原的浓度。反之，固定抗原的浓度，便可检测抗体的含量（称为反向火箭电泳）。第三节凝胶内沉淀试验第32页，共47页。（二）火箭免疫电泳结果判断：抗体浓度不变→沉淀峰高度与抗原量呈正相关抗原浓度不变→沉淀峰高度与抗体量呈正相关（反向火箭电泳）绘制标准曲线，就可根据沉淀峰的高度在标准曲线中计算出待测样品浓度。第三节凝胶内沉淀试验第33页，共47页。免疫沉淀试验第1页，共47页。（优选）免疫沉淀试验第2页，共47页。目录第一节免疫沉淀试验的基本原理第二节液相免疫沉淀试验第三节凝胶内免疫沉淀试验第四节免疫沉淀试验的临床应用第五节临床常用免疫沉淀试验试剂方法特点第六节影响免疫沉淀试验的主要因素第3页，共47页。第一节免疫沉淀试验的基本原理一二三免疫沉淀试验的特点免疫沉淀试验的分类基本原理第4页，共47页。第一节免疫沉淀试验的基本原理一、基本原理：沉淀反应将可溶性抗原与相应抗体置于温度、酸碱度适宜的一定电解质溶液中，两者按适当比例形成肉眼可见的沉淀线或沉淀环，并根据所形成的沉淀物计算待测抗原或抗体的含量。第5页，共47页。二、免疫沉淀试验的分类液相沉淀试验凝胶内沉淀试验环状免疫沉淀试验絮状免疫沉淀试验透射免疫比浊试验散射免疫比浊试验免疫扩散试验免疫电泳技术第一节免疫沉淀试验的基本原理第6页，共47页。三、免疫沉淀试验的特点1.阶段性免疫沉淀试验分两个阶段，第一阶段为抗原抗体特异性结合，形成不可见的可溶性免疫复合物；第二阶段则形成可见的免疫复合物。2.特异性免疫沉淀试验为抗原与相应抗体发生特异性结合反应的过程，因此具有特异性。3.抗原性质参与免疫沉淀试验的抗原必须为可溶性抗原。4.抗体的选择多克隆抗体与抗原多个表位结合，易形成沉淀，故非常适用于免疫沉淀试验；单克隆抗体只与抗原一个表位结合，不易形成交联。若抗原表面有两个以上相同的表位，单克隆抗体也可用于免疫沉淀试验。第一节免疫沉淀试验的基本原理第7页，共47页。第二节液相免疫沉淀试验一二免疫浊度测定絮状免疫沉淀试验第8页，共47页。液相免疫沉淀试验（liquidphaseimmunoprecipitationtest）是指可溶性抗原与相应抗体在含有电解质的液相介质中反应，形成肉眼可见的沉淀物。根据实验方法和所形成的免疫复合物呈现的沉淀现象的不同，可将液相免疫沉淀试验分为环状免疫沉淀试验、絮状免疫沉淀试验和免疫浊度测定。第二节液相免疫沉淀试验第9页，共47页。一、絮状沉淀试验（flocculation）是可溶性抗原与相应抗体特异结合，在电解质存在的条件下，形成肉眼可见的絮状沉淀物。此方法受抗原抗体比例的影响非常明显，常用来作测定抗原抗体反应的最适比例。有抗原稀释法、抗体稀释法和方阵滴定法三种操作方法。第二节液相免疫沉淀试验第10页，共47页。二、免疫浊度测定（immunoturbidimetry）原理：可溶性抗原与相应抗体特异性结合，两者在比例合适和增浊剂作用下，可快速形成较大的免疫复合物，使反应液出现浊度；当反应液中保持抗体过量且浓度固定时形成的免疫复合物随抗原量增加而增加，反应液的浊度也随之增加，即待测抗原量与反应液的浊度成正相关；与标准曲线比较，即可计算出待测抗原的含量。第二节液相免疫沉淀试验第11页，共47页。（一）透射免疫比浊试