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基于分子信标及生物条码技术的生物传感器：端粒酶与肿瘤细胞检测的创新策略

一、引言

1.1研究背景与意义

癌症，作为一组严重威胁人类健康的恶性疾病，其发病率和死亡率在全球范围内持续攀升，给个人、家庭和社会带来了沉重的负担。根据世界卫生组织国际癌症研究机构（IARC）发布的2020年全球最新癌症负担数据，全球新发癌症病例1929万例，癌症死亡病例996万例。在我国，癌症同样是重大公共卫生问题，国家癌症中心发布的最新数据显示，2015年我国恶性肿瘤发病约392.9万人，死亡约233.8万人，且近年来癌症发病率仍呈上升趋势。

癌症的早期检测对于提高患者的治愈率和生存率至关重要。以肺癌为例，早期肺癌患者（I期）的五年生存率可达70%-90%，而晚期肺癌患者（IV期）的五年生存率仅为5%-15%。然而，由于癌症早期症状隐匿，缺乏有效的早期检测手段，多数患者确诊时已处于中晚期，错失了最佳治疗时机。因此，开发高灵敏度、高特异性的癌症早期检测技术具有迫切的现实需求和重要的临床意义。

端粒酶作为一种在肿瘤细胞中广泛表达的特殊逆转录酶，在癌症的发生、发展过程中扮演着关键角色。端粒是真核细胞染色体末端的一种特殊结构，由富含鸟嘌呤的重复DNA序列及其相关蛋白组成，其主要功能是保护染色体末端稳定，防止染色体降解、融合和重组。在正常体细胞中，由于DNA复制机制的限制，每次细胞分裂后端粒会逐渐缩短，当端粒缩短到一定程度时，细胞就会进入衰老或凋亡状态。而在肿瘤细胞中，端粒酶被激活，它能够以自身RNA为模板，合成端粒DNA并添加到染色体末端，从而维持端粒的长度，使肿瘤细胞能够逃避衰老和凋亡，获得无限增殖的能力。研究表明，85%-90%的原发性肿瘤细胞都具有端粒酶活性，而在大多数正常体细胞中，端粒酶活性则受到严格抑制。因此，端粒酶被认为是一种极具潜力的肿瘤标志物，通过检测端粒酶活性，可以实现对多种癌症的早期诊断和病情监测。

分子信标和生物条码技术作为两种新兴的生物分析技术，在生物传感器的构建中展现出独特的优势。分子信标是一种具有发卡结构的单链寡核苷酸探针，其两端分别标记有荧光基团和淬灭基团。在自由状态下，分子信标的发卡结构使荧光基团和淬灭基团紧密靠近，荧光被淬灭；当分子信标与目标分子特异性结合时，发卡结构打开，荧光基团和淬灭基团分离，从而产生强烈的荧光信号。这种独特的荧光开关特性使得分子信标能够实现对目标分子的高灵敏度、高特异性检测，并且具有良好的抗干扰能力和实时检测性能。

生物条码技术则是利用DNA条形码对目标分子进行标记和检测的一种技术。DNA条形码是一段具有特定序列的DNA片段，它可以与目标分子特异性结合，就像商品的条形码一样，能够准确地标识目标分子的身份。生物条码技术具有高特异性识别、高灵敏度检测、多目标检测能力、自动化和易操作性以及易于集成和扩充等优点。通过将生物条码与生物传感器相结合，可以实现对多种生物标志物的同时检测，大大提高检测效率和准确性。

综上所述，本研究基于分子信标及生物条码技术构建生物传感器，用于检测端粒酶及肿瘤细胞，旨在开发一种新型、高效的癌症早期检测方法。该研究不仅有助于深入理解癌症的发病机制，为癌症的早期诊断和治疗提供新的理论依据和技术支持，还具有重要的临床应用价值和社会经济效益，有望为癌症患者带来更多的生存希望。

1.2国内外研究现状

在国外，对于利用分子信标和生物条码技术检测端粒酶及肿瘤细胞的研究开展得较早且较为深入。一些研究团队利用分子信标构建了荧光生物传感器，通过设计与端粒酶延伸产物互补的分子信标序列，实现了对端粒酶活性的高灵敏度检测。例如，美国某研究小组将分子信标与纳米技术相结合，制备了纳米颗粒-分子信标复合物，用于检测肿瘤细胞中的端粒酶，显著提高了检测的灵敏度和特异性，能够检测到极低浓度的端粒酶活性。此外，在生物条码技术方面，国外学者通过优化DNA条形码的设计和检测方法，实现了对多种肿瘤标志物的同时检测。如利用微流控芯片技术与生物条码技术相结合，开发出了一种能够快速、准确检测多种肿瘤细胞的生物传感器，可在短时间内对临床样本中的肿瘤细胞进行定量分析。

国内的相关研究也取得了一系列重要成果。许多科研团队致力于改进分子信标和生物条码技术，以提高检测的性能和应用范围。在分子信标检测端粒酶的研究中，国内学者通过对分子信标结构的优化，如调整茎环结构的长度和稳定性，提高了分子信标对端粒酶的识别能力和荧光信号强度。同时，在生物条码技术与生物传感器的集成方面，国内研究人员开发了基于电化学传感器的生物条码检测系统，通过将DNA条形码与电化学信号转换相结合，实现了对肿瘤细胞的高灵敏电化学检测。此外，一些研究还将分子信标和生物条码技术联合应用，构建了