FragmentAnalysis使用手册说明.PDFVIP

FragmentAnalysis使用手册

一、仪器简介

二、使用前期准备

三、开机和关机程序

四、操作指南

五、数据分析与导出

六、注意事项及管理规定

一、FA简介

二、使用前期准备

1、耗材准备：

耗材准备：96孔板2块（如百赛生物，型号BS3003096-2）及相应的封膜2张

（AxygenPCR-TS），50mL离心管2个（康宁或其他），移液器（1000L、100L、

10L）及相应的枪头。

2、DNA样品要求：

（1）DNA样品的长度为25bp-5000bp；

（1）DNAsmear浓度为50pg/ul-5ng/ul，体积为2ul

（2）其他样品不超过500pg/ul。

3、仪器组成介绍

三、开机及关机

1、先打开机器电源，在设备背面右下角（如下）；

2、打开电脑，凭预约系统账号（Username）和密码（Password）登录；

3、关机时，先关闭软件，退出预约系统后，关闭计算机，然后关闭仪器电源。

四、操作步骤

1、从4℃冰箱取出标有FA胶的50mL离心管，打开仪器的门，把空离心管从标

有“Gel1”的位置上取，换上装胶的离心管（中心工作人员已配好），同时检查标

有“COND”的离心管里ConditioningBuffer是否够10mL，如不够，请从4℃冰箱

取出已稀释好Buffer添加，特别提示跑一次样品至少需要10mL胶和10mL

ConditioningBuffer。如遇特殊情况，请遵守工作人员安排，再根据下面方法配胶

和配ConditioningBuffer（常温5XCapillaryConditioningSolution,用蒸馏水稀释至

1X）。

2、在96孔深孔板的A1到A12孔分别加1×Inletbuffer1mL，如果冰箱配好的Inletbuffer

不足，请把5×Inletbuffer稀释成1×的再使用。

3、在一块新的96孔板中的A1-A12孔，加100ulTEbuffer

4、配制样品，22ulDM溶液加2ul样品，如果样品不够11个，其余孔需加24ulblankbuffer。

如果样品超过11个，在第二次跑样时就不需要再跑Ladder，直接跑12个样品即可。

5、在电脑桌面上双击FragmentAnalyzer软件，在UserID处填写user后，点击OK即可；

6、软件打开后

7、在软件上点击utilities，点solutionlevels，然后打开舱门，检查GEL1和conditoningBuffer

体积，与solutionlevel显示项是否相符，如不相符，按实际体积实填写（更改）；

8、选择样品排A—H，选择上其中一排，在SampleID中输入样品名字；

9、点击“RunselectedGroup”栏下的Addtoqueue,弹出对话框，在Method中选择DNF-474-

33-PKU程序，其他勿动即可，点击OK；

10、在MethodQueue出现一个任务，然后点击三角形开始运行；

五、数据分析与导出

1、在桌面上双击打开PROseze2.0软件

2、点击file，选择OpenFile；

3、在C:\AATI/Data中选中用户跑完后的结果，点击open；

4、检查Ladder是否正常，如果不正常可以手动调整，调整失败后联系工作人员；

5、通过点击鼠标的右键，可以手动调整LM或UM的位置，也可以把多余的峰删除或合并；

6、如果连续跑样大于1次，可用上一次的Ladder。首先先把第一次跑的Ladder导出来，点

击软件左上角“bp”会出现一个曲线，点击“Export”导出到桌面。第二次分析结果时，点

击“bp”，点击“Useimportedladderprofile”，从桌面上找到保存的文件，导入后，点击apply。

（如果用户只跑一次样品，可以忽略此步骤）

注意事项

1、实验结束后，做好以下几点

1)请把FA胶拿下用锡箔纸包好后放回4℃冰箱，把空离心管拧到GEL1上；

2)把96孔深孔板中的Buffer倾倒干净，然后用蒸馏水冲洗两次后用封膜封好，放置于冰

箱；

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