高中生物基因工程与蛋白质工程知识与实例分析（共37页）.pdfVIP

基因工程与蛋白质工程相关知识及实例解析

一、知识考点

（一）基因工程的操作步骤

1、目的基因的筛选与获取

（1）筛选方法：从相关已知结构和功能清晰的基因中筛选

（2）获取与扩增方法：PCR获取与扩增

①PCR（聚合酶链式反应，需要在一定的缓冲溶液中进行）：

原理：DNA半保留复制原理

步骤：a.变性：目的基因DNA受热变性后解为单链，温度为94℃，5min

b.复性：引物与单链相应互补序列结合，温度为55℃

C.延伸：以单链DNA为模板，在TaqDNA聚合酶作用下延伸，温度为72℃

基本条件：DNA模板、4种脱氧核苷酸、2种引物、耐高温DNA聚合酶等

②PCR产物鉴定方法：琼脂糖凝胶电泳鉴定，在凝脂胶中DNA分子的迁移速率与凝胶的浓度、DNA分

子的大小和构象等有关。

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2、基因表达载体的构建（是载体的一种）

（1）构建基因表达载体的目的：使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传给下一代，同时，

使目的基因能够表达和发挥作用

（2）基因表达载体的结构：复制原点、目的基因、启动子、终止子、标记基因

（3）构建方法：通常用两种限制酶分别切割含目的基因的DNA片段和载体

3、将目的基因导入受体细胞

（1）方法：