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基于酵母双杂交体系的IFP35相互作用蛋白筛选与分析

一、引言

1.1研究背景

蛋白质作为生命活动的主要承担者，其功能的发挥往往依赖于与其他蛋白质或生物分子之间的相互作用。蛋白质相互作用网络构成了细胞内复杂的信号传导通路和调控机制，参与了从细胞增殖、分化、凋亡到代谢调节、免疫应答等几乎所有的生理过程。深入研究蛋白质相互作用，对于揭示生命过程的本质、理解疾病的发生发展机制以及开发新型治疗策略都具有重要意义。例如，在癌症研究中，明确致癌蛋白与其他蛋白的相互作用，有助于找到关键的治疗靶点，为开发更有效的抗癌药物提供理论基础。

IFP35（Interferon-inducedprotein35）蛋白是一种干扰素诱导蛋白，在多种生理和病理过程中发挥着关键作用。在免疫调节方面，IFP35参与了机体的抗病毒、抗菌免疫反应。研究表明，在病毒感染时，IFP35的表达水平会显著上调，它可以通过与病毒蛋白或宿主细胞内的其他免疫相关蛋白相互作用，调节免疫细胞的活性和细胞因子的分泌，从而影响机体对病毒的防御能力。在炎症反应中，IFP35也扮演着重要角色，它可能参与了炎症信号通路的调控，影响炎症的发生和发展进程。此外，IFP35还与细胞凋亡、细胞周期调控等过程存在关联。然而，目前对于IFP35在这些过程中具体的作用机制尚未完全明确，尤其是其与哪些蛋白质相互作用来行使功能，仍有待进一步深入探索。因此，筛选IFP35的相互作用蛋白，对于全面理解IFP35的生物学功能以及相关生理病理过程的分子机制具有迫切的必要性。

1.2酵母双杂交体系概述

酵母双杂交体系是一种经典且广泛应用于研究蛋白质-蛋白质相互作用的分子生物学技术，由Fields和Song等在研究真核基因转录调控时首先建立。其基本原理基于真核生物转录因子的结构特性。典型的真核生物转录因子，如GAL4，由两个相对独立的结构域组成：DNA结合结构域（DNAbindingdomain，BD）和转录激活结构域（transcriptionactivationdomain，AD）。BD能够识别并结合特定的DNA序列，而AD则可以与转录复合体的其他成分相互作用，启动下游基因的转录。在酵母双杂交体系中，将已知蛋白（诱饵蛋白）与BD构建成融合蛋白，将待测蛋白（猎物蛋白）与AD构建成融合蛋白。当诱饵蛋白和猎物蛋白在酵母细胞内发生相互作用时，它们会拉近BD与AD的空间距离，使两者在空间上靠近，从而重新构成一个具有完整功能的转录激活因子，进而启动下游报告基因的表达。通过检测报告基因的表达情况，就可以判断诱饵蛋白与猎物蛋白之间是否存在相互作用。

酵母双杂交体系在蛋白互作研究中具有诸多优势。操作相对简便，不需要复杂的仪器设备和繁琐的实验步骤，一般实验室都具备开展该实验的条件。该技术具有高通量的特点，能够通过构建文库，一次性对大量的蛋白质进行筛选，快速发现与已知蛋白相互作用的潜在蛋白，这对于构建蛋白质相互作用网络至关重要。而且，酵母双杂交体系是在活细胞内进行检测，能够模拟蛋白质在体内的真实环境，蛋白质的折叠、修饰等过程更接近生理状态，相比于体外实验，其结果更能反映蛋白质在生物体内的真实相互作用情况。然而，酵母双杂交体系也存在一些局限性。假阳性率较高，部分蛋白可能会非特异性地结合BD或AD，或者自身具有转录激活活性，从而导致报告基因的非特异性表达，产生假阳性结果；假阴性情况也可能出现，一些膜蛋白、核外蛋白等难以进入酵母细胞核，或者蛋白质之间的相互作用依赖于特定的翻译后修饰，而酵母细胞中可能缺乏这些修饰，导致无法检测到真实存在的相互作用。

1.3研究目的与意义

本研究旨在利用酵母双杂交体系，以IFP35蛋白为诱饵，筛选与其相互作用的蛋白，从而深入探究IFP35的功能机制。通过成功筛选出IFP35的相互作用蛋白，可以明确IFP35在细胞内参与的具体信号通路和调控网络，进一步揭示其在免疫调节、炎症反应、细胞凋亡等生理病理过程中的作用机制，填补目前对于IFP35作用机制研究的空白。

在疾病研究方面，许多疾病的发生发展都与蛋白质相互作用的异常密切相关。IFP35在多种生理病理过程中发挥关键作用，深入了解其相互作用蛋白及作用机制，有助于揭示相关疾病的发病机理。例如，在感染性疾病中，IFP35参与了机体的免疫防御反应，明确其相互作用蛋白可能为开发新的抗感染治疗策略提供靶点；在炎症相关疾病中，IFP35对炎症反应的调控作用可能与某些炎症性疾病的发生发展相关，研究其相互作用蛋白有助于理解这些疾病的发病机制，为疾病的诊断和治疗提供新的思路。

从药物研发角度来看，明确IFP35的相互作用蛋白可以为药物研发提供新的靶点。通过干扰IFP35