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电泳厂员工培训课件

第一部分

第一章:电泳基础知识概述

电泳的定义与原理

什么是电泳?

电泳是指带电荷的分子或颗粒在外加电场作用下,向着与其电性相反的电极方向迁移的物理化学现象。这一过程广泛应用于生物大分子的分离与分析。

影响迁移的关键因素

分子所带电荷的多少与性质

分子的大小、形状与分子量

凝胶基质的孔径大小

电泳的主要类型

琼脂糖凝胶电泳

主要用于核酸(DNA和RNA)的分离与分析。琼脂糖形成的大孔径网状结构,特别适合分离较大的核酸片段,是分子生物学实验室的标准技术。

孔径大,适合大分子

操作简便快速

成本相对较低

聚丙烯酰胺凝胶电泳

简称PAGE,主要用于蛋白质和小核酸片段的高分辨率分离。其细密的孔径结构能够精确区分分子量相近的生物大分子,是蛋白质分析的金标准。

分辨率高,精度好

适合小分子分离

电泳的应用领域

生物分子分离与分析

电泳技术在DNA测序、基因分型、蛋白质纯度检测等方面发挥着核心作用。通过电泳,研究人员可以快速准确地分离和鉴定各种生物大分子,为科学研究提供可靠数据支持。

质量控制与产品检测

在制药、生物技术和诊断试剂生产中,电泳是不可或缺的质量控制手段。它能够验证产品纯度、检测污染物、确认分子完整性,确保产品符合严格的质量标准。

研发实验支持

电泳仪设备全景

电泳仪器由多个精密部件组成,每个部件都在实验过程中发挥着特定作用。了解设备的结构和功能,是进行标准化操作的基础。

01

电泳槽与凝胶支架

承载凝胶并提供密闭的电泳环境

02

电源装置

提供稳定可调的直流电压和电流

03

电极系统

正负极连接,形成均匀电场

04

成像系统

用于观察和记录电泳结果

第二部分

第二章:电泳设备与材料介绍

电泳实验的成功离不开正确的设备选择和材料使用。本章将详细介绍电泳系统的各个组成部分、不同类型的凝胶基质、缓冲液系统以及样品处理要点,为您的实验操作奠定坚实基础。

电泳仪器组成

1

电泳槽系统

包括水平或垂直电泳槽,用于放置凝胶并容纳缓冲液。高质量的电泳槽能确保电场分布均匀,避免温度过高。

2

电源控制装置

提供精确可调的电压(通常50-300V)和电流输出。现代电源具备多种保护功能和预设程序,确保实验安全和重复性。

3

凝胶制备设备

包括凝胶模具、梳子、玻璃板等。这些工具用于制作均匀一致的凝胶,并形成规则的加样孔。

4

辅助工具

包括移液器、加样枪头、染色盘、成像设备等。这些工具保证了样品处理的准确性和结果记录的清晰度。

凝胶基质详解

琼脂糖凝胶

大孔径天然多糖基质

琼脂糖是从海藻中提取的天然多糖,溶解后冷却形成具有大孔径的三维网状结构。

适用范围

DNA片段:0.1-25kb

RNA分析

PCR产物检测

基因组DNA分离

优势特点

制备简单快速

无毒性,易处理

透明度好

可回收DNA片段

聚丙烯酰胺凝胶

高分辨率合成聚合物

通过丙烯酰胺单体与交联剂聚合形成,孔径可通过浓度精确调控,提供卓越的分辨率。

适用范围

蛋白质分离(SDS)

小核酸片段(10-1000bp)

等电聚焦

Westernblot样品制备

优势特点

分辨率极高

孔径可调范围广

机械强度好

重复性优异

缓冲液的选择与作用

TAE缓冲液

Tris-乙酸-EDTA,最常用的DNA电泳缓冲液,缓冲能力适中,适合常规分析

TBE缓冲液

Tris-硼酸-EDTA,缓冲能力强,适合长时间电泳和小片段DNA的高分辨分离

Tris-甘氨酸缓冲液

蛋白质电泳标准缓冲液,配合SDS使用,确保蛋白质按分子量分离

缓冲液的关键作用

维持pH稳定:防止电泳过程中pH变化影响分子电荷状态

提供离子环境:保证电流顺畅通过,形成均匀电场

保护生物分子:EDTA螯合金属离子,防止核酸降解

控制电导率:影响电泳速度和热量产生

样品与分子量标准

分子量标准品的重要性

分子量标准品(Marker或Ladder)是电泳实验中的标尺,通过与标准品比对,可以准确估算未知样品的分子大小。

标准品的选择原则

覆盖范围应包含待测样品

条带清晰,间隔合理

稳定性好,可长期保存

最好有参考条带标识

样品制备注意事项

确保样品浓度适宜(不宜过浓或过稀)

添加适量上样缓冲液和指示染料

避免反复冻融导致降解

-20°C或-80°C保存,避免污染

第三部分

第三章:电泳操作流程详解

标准化的操作流程是获得可靠实验结果的关键。本章将逐步讲解从凝胶制备到结果成像的完整操作过程,掌握每个环节的技术要点和质量控制措施,确保您的每次实验都能取得成功。

凝胶制备步骤

浓度计算

根据待分离分子大小选择合适的凝胶浓度。DNA用0.5-2%琼脂糖,蛋白质用8-15%聚丙烯酰胺

溶解加热

琼脂糖需微波加热至完全溶解透明;丙烯酰胺则需加入催化剂引发聚合反应

灌注模具

待溶液冷却至约60°C时,缓慢倒入模具中,插入梳子形成加样孔