辣椒WRKY转录因子cDNA的分离、鉴定与功能解析：开启植物抗逆分子机制新视野.docxVIP

辣椒WRKY转录因子cDNA的分离、鉴定与功能解析：开启植物抗逆分子机制新视野

一、引言

1.1研究背景与意义

辣椒（CapsicumannuumL.）作为一种重要的蔬菜和调味品，在全球范围内广泛种植。中国不仅是全球最大的辣椒生产国和消费国，还形成了从育种、种植到加工、销售的完整产业链。辣椒的种植面积常年稳定在1100万亩以上，产量常年在1600万吨以上，产区遍及全国各地。辣椒产业在农业经济中占据着重要地位，为农民增收和农业增效做出了重要贡献。

然而，辣椒在生长过程中会受到多种生物和非生物胁迫的影响，如病虫害、干旱、高温、低温等，这些胁迫严重影响了辣椒的产量和品质。据统计，病虫害每年可导致辣椒减产20%-50%，干旱和高温等非生物胁迫也会对辣椒的生长发育产生不利影响。因此，提高辣椒的抗逆性，培育抗逆品种，是辣椒产业可持续发展的关键。

转录因子在植物应对生物和非生物胁迫中发挥着重要作用。WRKY转录因子是植物中一类重要的转录因子家族，其成员参与了植物的生长、发育、代谢以及对生物或非生物胁迫应答的反应。WRKY转录因子能够与靶基因启动子中的W-box[(T)TGACC(A/T)]特异结合，调控基因的表达，从而响应植物的逆境胁迫及其它信号途径。研究表明，WRKY转录因子在植物抗病、抗虫、抗旱、抗寒等方面具有重要作用。在辣椒中，虽然已经有一些关于WRKY转录因子的研究报道，但相对于其他植物，辣椒WRKY转录因子的研究还相对较少，其功能和作用机制还不完全清楚。因此，深入研究辣椒WRKY转录因子，对于揭示辣椒抗逆的分子机制，培育抗逆品种，提高辣椒的产量和品质具有重要意义。

1.2WRKY转录因子概述

WRKY转录因子是植物特有的锌指型转录调控因子，因在其N-端含有由WRKYGQK组成的高度保守的7个氨基酸序列而得名。自从1994年Ishiguro等在甜薯中克隆出第一个WRKY基因（SPF1）以来，在多种植物中陆续发现了WRKY基因。WRKY转录因子通常以基因家族的形式存在，如拟南芥中有74个，水稻中有109个，玉米中119个，杨树中104个。

WRKY转录因子的基本结构是由一个转录激活域与N端的完整DNA结合域组成。其DNA结合域中至少含有一个WRKY结构域，该结构域是一段大约由60个高度保守的氨基酸所组成的多肽序列，其中WRKYGQK序列是所有成员中都含有的7个绝对保守的氨基酸残基。除了WRKY结构域外，WRKY转录因子的DNA结合域中一般还含有一个锌指结构。根据WRKY结构域的数量及锌指结构的特征，可将WRKY转录因子分为3类：第I类WRKY转录因子含有2个WRKY结构域，且其锌指结构为C2H2型，该类WRKY转录因子的DNA结合功能主要由C-末端的WRKY结构域介导，N-末端WRKY结构域的功能尚不清楚，它可能参与WRKY转录因子与DNA相互结合的过程，从而提高转录因子结合靶位点的亲和力和特异性；第II类WRKY转录因子只含有1个WRKY结构域，其锌指结构也为C2H2型，大部分研究过的WRKY转录因子都属于该类型，Ⅱ类WRKY转录因子的WRKY结构域序列与I类WRKY转录因子C-末端WRKY结构域序列的相似性比N-末端WRKY结构域序列的相似性更高，这也说明I类WRKY转录因子C-末端WRKY结构域与其他类型中只含1个WRKY结构域的靶DNA结合功能相同；第Ⅲ类WRKY转录因子也只含有1个WRKY结构域，但其锌指结构为C2HC型。

WRKY转录因子的表达具有组织特异性和诱导性。目前已识别和克隆的WRKY基因的表达受各种环境（如病原体、真菌诱导子、信号分子水杨酸及其功能类似物、植物不同发育阶段、干旱、低温、创伤、机械胁迫等）的诱导，其表达具有快速、瞬时等特点。WRKY转录因子参与了植物体内的各种生理过程，如细胞质膜和细胞壁的生物学调节、淀粉代谢调控、植物抗病性的提高、叶绿体光合作用和叶片呼吸过程的调控、光合作用环境适应性和开花过程的控制以及氮素利用效率调控等。

1.3研究目的与内容

本研究旨在分离辣椒WRKY转录因子cDNA并鉴定其功能，为揭示辣椒抗逆的分子机制提供理论依据，同时为辣椒的遗传改良提供基因资源。具体研究内容包括：

辣椒WRKY转录因子cDNA的分离：采用同源克隆法或RACE技术，从辣椒中分离WRKY转录因子的cDNA序列。

序列分析：对分离得到的cDNA序