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耐高温冠菌素生产菌株选育与高效生产工艺构建研究

一、引言

1.1研究背景与意义

在农业生产中，植物生长调节剂对于保障作物产量与品质发挥着关键作用。冠菌素作为一种新型植物调节物质，近年来备受关注。它是一种天然的植物信号分子调控剂，与茉莉酸（JA）结构性质相似，能参与调控植物生长发育的众多生理过程。冠菌素犹如一把“钥匙”，可迅速开启植物内源分子信号开关，进而参与植物抗逆防病、转色增糖等众多生理过程，保障植物健康生长，提升农产品产量与品质。

在水稻、小麦、玉米、棉花、大豆等大田作物的种植中，冠菌素展现出了广阔的应用前景。研究显示，在高温干旱胁迫条件下，用冠菌素处理小麦，有利于其叶片维持较高的相对含水量，促进可溶性蛋白的合成，提高细胞的渗透调节能力，在一定程度上缓解高温对植物的伤害，提升其抗高温能力，进而提高小麦千粒重以及产量。在大豆上，其对光温敏感，尤其是出苗期对低温的敏感性制约了种植范围和产量提升，冠菌素则可通过相关作用机制帮助大豆应对温度胁迫。对玉米而言，冠菌素处理能显著提高叶片中的可溶性糖和脯氨酸含量，使玉米幼苗气孔张开程度更大，促进二氧化碳进入和利用，保持较高的光合作用，合成更多干物质，增加玉米幼苗茎基部和根长。在棉花种植中，冠菌素不仅有增产作用，还能增强棉花对病害的抗逆性，促进棉花生长，使茎秆强壮，促使棉花提前成熟，达到增产效果，且低浓度的冠菌素有利于增加棉花的耐盐能力，高浓度则能促进叶片脱落，利于棉花机械化收获。

然而，当前冠菌素在实际应用中面临着在高温环境下稳定性不佳的问题，这极大地限制了其在炎热地区的推广与应用。在一些热带地区或是夏季高温时段的农业生产中，由于冠菌素在高温下易分解失活，导致其无法充分发挥对作物生长的调节作用，使得农民难以借助这一新型调节剂来应对高温给作物带来的不利影响，如生长受阻、产量降低、品质下降等问题。选育耐高温的冠菌素生产菌株，探索高效的高温生产工艺迫在眉睫。通过选育耐高温菌株，可确保在高温发酵环境下，菌株依然能够稳定、高效地合成冠菌素；优化高温生产工艺则能进一步提高冠菌素在高温条件下的产量与质量，降低生产成本。这不仅能够拓展冠菌素的应用范围，满足炎热地区农业生产对植物生长调节剂的需求，还能为全球农业可持续发展提供有力的技术支持，对保障粮食安全、提高农产品质量具有重要意义。

1.2国内外研究现状

国外对于冠菌素的研究起步较早，自1977年Ichihara等从丁香假单胞菌绛红致病变种的培养液中分离出冠菌素以来，众多科研团队围绕其结构、生理功能、生物合成途径等方面展开研究。在冠菌素生产菌株方面，早期主要聚焦于野生菌株的筛选与基础特性研究，发现野生菌株的冠菌素生产能力普遍较低，难以满足工业化生产需求。随后，通过诱变育种、基因工程等技术手段对菌株进行改造，如利用转座子诱导突变、基因重组等方法构建高产冠菌素的基因工程菌，在一定程度上提高了菌株的产素能力。在生产工艺研究上，对发酵条件进行了多方面探索，包括发酵温度、pH值、营养物质供给等因素对冠菌素产量的影响，部分研究运用响应面法等优化策略对发酵工艺进行优化，取得了一定成果，但在耐高温生产菌株选育和高温生产工艺方面，仍存在诸多不足，如现有耐高温菌株在高温下的产素稳定性不够理想，高温生产工艺的成本较高、效率有待提升等问题。

国内在国家“863计划”和重点研发计划支持下，对冠菌素的研究取得了显著进展。成都新朝阳作物科学股份有限公司成功建立了全球首条冠菌素发酵生产线，并围绕菌种优化、生产工艺及应用技术构建了完整的知识产权体系。在菌株选育方面，采用多种诱变技术和基因编辑手段，筛选出了一些性能优良的菌株，在生产工艺上，通过对发酵过程中各种参数的精细调控，提高了冠菌素的发酵效价和原药纯度。然而，针对高温环境下的菌株选育和生产工艺优化研究尚处于发展阶段，虽有研究筛选出在一定高温条件下可生长并产冠菌素的菌株，但距离实现大规模、低成本、稳定的高温生产仍有差距，高温生产工艺在实际应用中还面临着诸多技术难题需要攻克。

1.3研究内容与技术路线

本研究主要内容包括以下几个方面：首先，进行耐高温菌株选育，从现有的冠菌素生产菌株出发，通过物理诱变（如紫外线照射、离子束注入等）、化学诱变（如甲基磺酸乙酯、硫酸二乙酯等处理）以及复合诱变等方法，结合高温筛选压力，诱导菌株产生突变，筛选出能在高温条件下高效生长且稳定合成冠菌素的优良菌株。其次，开展生产工艺优化工作，运用响应面优化法，系统研究发酵温度、时间、培养基成分（如酵母提取物浓度、胰酶用量、碳源和氮源种类及比例等）对冠菌素产量和质量的影响，确定高温条件下的最佳生产工艺参数。最后，对选育出的耐高温菌株和优化后的生产工艺进行稳定性验证，通过多次重复实验，考察菌株在连续传代培养过程中的遗传稳定性和产素稳定性，以及生产