生物化学实验.pdfVIP

物化学实验

实验1、糖类的颜反应

1.α-萘酚反应

糖在浓机酸（硫酸或盐酸）作下，脱成糠醛及糠醛衍物，后者能与α-萘酚成紫红物质。

注意：因糠醛及糠醛衍物对此反应均呈阳性，不是糖类的特异反应。

2.间苯酚反应

在酸作下，酮糖脱成羟甲基糠醛，后者再与间苯酚作成红物质。

此反应是酮糖的特异反应。因为醛糖在同样条件下呈反应缓慢，只有在糖浓度较或煮沸时间较长时，才呈微弱的阳性反

应。

2、还原作

许多糖类由于其分中含有由的或潜在的醛基或酮基，因此在碱性溶液中能将铜、铁、银等属离还原，同时糖类本被

氧化成糖酸及其他产物。糖类这种性质常被利于检测糖的还原性及还原糖的定量测定。本实验所的试剂为斐林试剂和本尼

迪克特试剂。它们都是Cu2＋的碱性溶液，能使还原糖氧化本被还原成红（颗粒）或黄（颗粒）的Cu2O沉淀。

实验脂肪碘值的测定

碘值（价）是指100g脂肪在定条件下吸收碘的克数。碘值是鉴别脂肪的个重要常数，可以判断脂肪所含脂肪酸的不饱

和程度。

脂肪中常含有不饱和脂肪酸，不饱和脂肪酸具有个或多个双键，能与卤素起加成作吸收卤素。

常碘与脂肪中不饱和脂肪酸的双键起加成作。脂肪的不饱和程度越，所含的不饱和脂肪酸越多，与其双键起加成作的

碘量就越多，碘值就越。故可碘值表脂肪的不饱和度。I2+－CH=CH－－CHI－CHI－

本实验溴化碘(Hanus试剂)代替碘。定量(必须过量)溴化碘和待测的脂肪作后，硫代硫酸钠滴定的法测定溴化碘

的剩余量，然后计算出待测脂肪吸收的碘量，求得脂肪的碘值。

加成作：IBr+－CH=CH－－CHI－CHBr－

剩余溴化碘中碘的释放：IBr+KIKBr+I2

再硫代硫酸钠滴定释放出来的碘：I2+2Na2S2O32Na2S4O6+2NaI

思考题：何谓空溶液和空实验？空实验有何意义？

在各种分析法中，为消除扰，与测定试样时完全致的条件进测定的溶液。

意义：去除些杂质的影响，使实验结果更有说服

实验三氨基酸的分离鉴定--纸层析法

纸层析原理：在纸上，被吸附在纤维素的纤维之间形成固定相，由于纤维素与的氢键作，使不易扩散，并能与跟混

合的溶剂(有机相)形成类似不相混合的两相。当有机相沿纸流动经过层析点时，层析点上的溶质就在相和有机相之间进分

配，有部分溶质离开原点随有机相移动进溶质的区域，这时重新进分配，部分溶质从有机相进相。当有机

相不断流动时，溶质就沿着有机相流动的向移动，不断进分配。溶质中各组分的分配系数不同，移动速率也不同，因可

以彼此分开。

物质被分离后在纸层析图谱上的位置是Rf值（移值）来表的：

原点到层析点中的距离

Rf＝____________________

原点到溶剂前沿的距离

在定的条件下某种物质的Rf值是常数，Rf值的与物质的结构、性质、溶剂系统、层析滤纸的质量、展层式、层析温度

和pH等因素有关。本实验利纸层析法分离氨基酸。思考题

1．何谓纸层析法？

2．何谓Rf值？影响Rf值的主要因素是什么？

3．怎样制备扩展剂？

将20ml正丁醇和5ml冰醋酸放分液漏中，与15ml混合充分振荡静置后分层，放出下层层，上层即为扩展剂

实验四蛋质及氨基酸的呈反应

（）双缩脲反应

双缩脲反应:尿素加热180℃左右，成双缩脲并放出分氨。双缩脲在碱性环境中能与Cu2+结合成紫红化合物。

蛋质分中有肽键，其结构与双缩脲相似，能发双缩脲反应。这可于蛋质的定性或定量测定。

注意:①双缩脲反应不仅为含有两个以上肽键的物质所特有，许多含有个肽键和个氨基的物质也能发此反应如–CS-

NH2，-CH2-NH2，O=CC=O等。

NH2NH2

②NH3也扰此反应，因为NH3与Cu2+可成暗蓝的络离(Cu(NH3)42+，四氨合铜)。因此，切蛋质或肽以上的

多肽都有双缩脲反应，但有双缩脲反应的物质不定都是蛋质或多肽。

（）茚三酮反应

除脯氨酸，羟脯氨酸和茚三酮反应产黄物质外，所有α-氨基酸及切蛋质都能和茚三酮反应成蓝紫物质。β-丙氨

酸、氨和许多级胺都呈正反应(尿素、马尿酸和肽键上的亚氨基不呈现此反应。)因此，虽然蛋质和氨基酸均有茚三酮反

应，但能与茚三酮呈阳性反应的不定是蛋质或氨基酸。在定性定量测定中，应严防扰物存在。

该反应分灵敏，1：1500000浓度的氨基酸溶液即