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血液分析仪五分类技术原理

随着电子技术、流式细胞技术、激光技术、电子计算机技术和新荧光化学

物质等各种高新技术在血细胞分析仪中的应用.使血细胞分析仪的检测原理不断

完善、测量参数不断增加、检测水平不断提高.尤其在白细胞五分类技术方面，

已发展到利用多项技术(如射频、细胞化学染色、流式细胞术和荧光染色技术等)

联合同时检测一个白细胞.再用先进的计算机技术区分、辨别经上述方法处理后

的各自细胞间的细胞差别.综合分析实验数据，得出较为准确的白细胞分类结

果。为临床疾病的诊断、治疗提供了重要的实验室依据。近年来。可以对白细

胞进行五分类计数的血细胞分析仪已经普遍使用。本文就目前血细胞五分类测

定中常用技术及其最新应用进展作一综述。

1血细胞五分类技术的原理

流式细胞术流式细胞术(flowcytometry，FCM)是一种综合应用光学、机械学、流体

力学、电子计算机、细胞生物学、分子免疫学等学科技术，使被测溶液流经测量区域，并

逐一检测其中每一个细胞的物理和化学特性，从而对高速流动的细胞或亚细胞进行快速定

量测定和分析的方法。

首先，待测细胞经处理或染色后被压人流动室，与此同时，不含细胞的缓冲液在高压

下从鞘液管喷出，鞘液管人口方向与待测样品流成一定角度，这样鞘液就能被包绕着样品

高速流动，组成一个圆形的流束，待测细胞在包绕下单行排列，依次通过检测区域.在激光

束的照射下产生散射光和激发荧光。这两个光源信号分别反映了细胞体积的大小和内部的

信息.经光电倍增管接收后可转换为电信号，再通过模，数转换器.将连续的电信号转换为

可被计算机识别的数字信号，经计算机处理，可将分析结果显示在屏幕上。

为了保证细胞单个排列地逐一通过检测区域，鞘流技术在流式细胞术中被广泛应用。

根据层流理论，由于两种液体的流速和压力不同。在一定条件下样品溶液与包裹它的鞘液

在流动中可以保持相互分离并且同轴。同时鞘液流可以加速样品溶液中颗粒的流动并迫使

他们的流动轨迹保持在液流的中轴线上，使细胞单排列地逐一通过检测区域，这便是所谓

的液流聚焦原理

1_2阻抗法根据库尔特原理，将不良导体血液按一定比例稀释于等渗的电解液中，在

小孔电极的两侧加一恒流源.在负压作用下，使稀释的血细胞通过小孔。当细胞通过截面时

会由于电阻增大产生相应的脉冲，其脉冲的幅度与细胞的体积成正比，脉冲的频度与细胞

的数量成正比。这便是著名的库尔特原理或称变阻脉冲原理。利用库尔特原理可以有效地

区分淋巴及单核细胞。

激光散射法／多角度偏振光散射技术

根据光散射理论，当激光照射到流动室内流过的每一个细胞时，由于细胞的物理特

性，部分光线从细胞上经不同的角度散射。其中，前向小角度散射光的光强可以反应细胞

体积；大角度散射光的光强可以反应细胞核，浆复杂度和细胞颗粒的信息；而侧向散射光

的光强可以反应细胞膜、核膜、细胞质的变化。因此，可以依据细胞表明光散射的特点对

细胞进行分类。用激光光源产生的单色光束直接进入计数池的敏感区，在不同角度(10

度～7O度)对每个细胞进行扫描分析，测定其散射光强度，从而提供细胞结构、形态的光

散射信息。由于粗颗粒细胞的散射强度比细颗粒细胞更强，故光散射对细胞颗粒的构型和

颗粒质量具有很好的区别能力。

多角度偏振散射技术用偏振激光束射照单个排列细胞，并进一步分辨细胞。该技术采

用了l0度窄角和偏振加消偏振检测法，分辨能力有所提高。它首先测试中性，单核细胞，

用0度～90度的散射数据，再测得90度D的衍射差，将嗜酸性和中性细胞分开.而嗜碱性

粒细胞、淋巴细胞及单核细胞则按其大小和内部结构不同的复杂性，所产生的散射光也各

异，用可调较的门限加以区分。其采用特定程序自动储存分析数据，并经计算机软件处

理，在屏幕上显示6个散点图和2个直方图。

各种细胞化学特性应用技术利用五种白细胞自身不同的化学性质.应用相应的化学试剂

加以区分

由于嗜酸性(或嗜碱性)粒细胞均有较强的碱性(或酸性)，因此在特殊的溶血剂作用下，

经过特定时间及温度的孵育，可使除嗜酸性(嗜碱性)粒细胞之外的所有细胞溶解或萎缩.经

处理之后的细胞根据阻抗脉冲计数法，可得相应嗜酸性(嗜碱性)细胞有效数值。

利用五种白细胞过氧化物酶活性的差异对白