高级卫生专业技术资格考试临床医学检验临床免疫技术(058)(正高级)梳理重点详解.docxVIP

高级卫生专业技术资格考试临床医学检验临床免疫技术(058)(正高级)梳理要点

一、免疫学基础

1.1抗原与抗体

抗原特性：免疫原性（诱导免疫应答能力）、反应原性（与抗体特异性结合能力）、特异性（表位决定抗原-抗体结合）

抗体结构：

IgG：单体，血清中含量最高，能通过胎盘，半衰期约21天

IgM：五聚体，早期感染标志，激活补体能力强

IgA：分泌型（sIgA）存在于黏膜表面，参与局部免疫

IgE：与过敏反应相关，结合肥大细胞

IgD：B细胞表面受体

抗原抗体反应影响因素：

温度（25-37℃为最佳）

pH（中性偏碱，7-9）

离子强度（低离子强度增强结合）

反应时间（需平衡时间，通常10-60分钟）

1.2补体系统

激活途径：

经典途径：IgG/IgM与抗原结合后激活C1q

旁路途径：微生物表面直接激活C3（需B因子、D因子）

MBL途径：甘露糖结合凝集素识别病原体糖结构

生物学功能：

溶菌/溶细胞作用

调理吞噬（C3b结合病原体）

清除免疫复合物

炎症介质（C3a、C5a）

1.3细胞免疫与分子免疫

T/B细胞分化：

T细胞：胸腺发育，TCR识别抗原肽-MHC复合物

B细胞：骨髓发育，BCR识别完整抗原

关键分子：

MHCI类：表达于所有有核细胞，呈递内源性抗原

MHCII类：表达于APC细胞，呈递外源性抗原

细胞因子：IL-2（T细胞增殖）、IFN-γ（激活巨噬细胞）、TNF-α（炎症反应）

黏附分子：ICAMFA-1（细胞间黏附）

二、免疫检测技术

2.1免疫沉淀与凝集技术

免疫扩散：

单向：Ouchterlony双扩散（定性/半定量）

对流免疫电泳：加速抗原-抗体结合，用于快速检测HBsAg

凝集反应：

直接凝集：血型鉴定（ABO/Rh）

间接凝集：类风湿因子（RF）检测（胶乳凝集法）

2.2免疫标记技术

ELISA：

夹心法：双抗体检测（如HBsAg、HIV抗原）

竞争法：小分子抗原检测（如激素、药物）

钩子效应：高浓度抗原导致假阴性，需稀释样本

化学发光免疫分析（CLIA）：

原理：化学发光底物（如鲁米诺）激发信号

优势：灵敏度达pg/mL级，线性范围宽（4-6个数量级）

放射免疫分析（RIA）：

与IRMA区别：RIA为抗原标记，IRMA为抗体标记（灵敏度更高）

2.3流式细胞术

关键参数：

FSC（前向散射）：细胞大小

SSC（侧向散射）：细胞复杂度

荧光信号：标记抗体的特异性

临床应用：

CD4/CD8计数（HIV监测）

白血病免疫分型（CD19、CD33等）

细胞凋亡检测（AnnexinV/PI双染）

2.4免疫组织化学（IHC）

操作要点：

抗原修复：热修复（EDTA、柠檬酸）或酶修复（胰蛋白酶）

抗体选择：单克隆抗体特异性高，多克隆抗体灵敏度高

显色系统：DAB（棕色）或AEC（红色）

判读标准：

定位：细胞膜/胞质/胞核

强度：0（阴性）~3+（强阳性）

2.5免疫比浊技术

原理：

透射比浊：测量光通过反应体系的吸光度下降

散射比浊：检测90°散射光强度（更灵敏）

应用：

CRP定量（高敏CRP用于心血管风险评估）

补体C3、C4检测（SLE活动性指标）

2.6时间分辨荧光免疫分析（TRFIA）

原理：稀土元素（铕、钐）标记，延时测量荧光信号（消除背景干扰）

优势：灵敏度高（fg/mL级）、无放射性污染

应用：甲状腺激素（T3/T4）、性激素、肿瘤标志物（CA125）

三、临床免疫应用

3.1自身免疫病

抗核抗体（ANA）：

荧光模式：均质型（抗dsDNA，SLE）、斑点型（抗Sm，SLE）、核膜型（抗LaminA/C）

重要抗体：

抗dsDNA：SLE特异性95%，活动性指标

抗Sm：SLE特异性99%，但敏感性仅25%

抗CCP：类风湿关节炎特异性95%

血管炎相关抗体：

cANCA（抗PR3）：肉芽肿性多血管炎

pANCA（抗MPO）：显微镜下多血管炎

3.2感染性疾病

HBV血清学标志物：

“大三阳”：HBsAg+、HBeAg+、抗-HBc+（高传染性）

“小三阳”：HBsAg+、抗-HBe+、抗-HBc+（传染性低）

抗-HBs+：免疫保护性抗体

HIV检测流程：

初筛：第四代ELISA（抗原+抗体）

确证：WesternBlot（p31、p39、gp41阳性）

核酸检测：病毒载量定量（CD4200时需加测）

3.3肿瘤免疫诊断

标志物特点：

AFP：肝癌，但妊娠、肝炎可假阳性

CEA：结直肠癌，但吸烟、结肠息肉可升高

CA125：卵巢癌，但子宫内膜异位症、盆腔炎可升高

PSA：前列腺癌，需结合fPSA/tPSA比值（0.15提示癌）

多标志物联合：

卵巢癌：CA125+HE4+ROMA指数

肺癌：CEA+CYFRA21-1+NSE

3.4过敏与移植免疫