食管鳞癌类器官培养用主要试剂材料与操作、分子实验操作流程.pdfVIP

T/CSBMEXXXX—XXXX

附录A

（资料性）

食管鳞癌类器官培养用主要试剂材料与操作

A.1主要试剂材料

A.1.1食管鳞癌类器官培养基主要构成

食管鳞癌类器官培养基主要构成详见表A.1。

表A.1

中文名称英文名称

分泌型Wnt信号通路激活剂R-Spondin-1

头蛋白Noggin

Wnt-3a激活因子Wnt-3a

表皮生长因子EpidermalGrowthFactor

胃泌素Gastrin

TGF-β通路抑制剂A83-01

p38MAPK通路激酶抑制剂SB202190

B27无血清添加剂B27

N2无血清添加剂N2

烟酰胺Nicotinamide

乙酰半胱氨酸N-acetylcysteine

ROCK激酶抑制剂Y-27632

青霉素/链霉素/两性霉素BPenicillin/Streptomycin/AmphotericinB

高级杜氏改良伊格尔培养基与营养混合物AdvancedDMEM/F12

4-羟乙基哌嗪乙磺酸缓冲液HEPES（1M）

即用型细胞培养冻存培养基Recovery细胞培养冻存培养基

非动物源性重组酶TrypLEExpress酶(1X)

脱氧核糖核酸酶IDnaseI

B

A.1.2类器官培养支架材料

食管鳞癌类器官生长需要3D空间结构支撑，目前存在水凝胶、纺丝、无动物源性仿生基质支架及

基质胶等，其中基质胶能充分模拟细胞外基质状态并包含维持干性的生长因子，作为大部分类器官培

养所需的支架材料。基质胶在大于等于10℃即开始成胶，小于等于4℃会转变为液态，4-10℃处于固

液混合状态，因此操作时需注意基质胶放置及操作温度。

A.1.3原代培养/传代培养消化酶

食管鳞癌上皮组织原代培养中涉及的消化酶主要有IV型胶原酶（collagenaseIV）、中性蛋白酶

（dispaseII）和胰蛋白酶。其作用是水解结缔组织中的基质和胶原蛋白成分，从而使食管鳞癌上皮

细胞从组织中充分分离出来，以利于制备为单细胞悬液或细胞团。食管鳞癌