北师社兽医临床诊疗技术教学课件3.1.3 血涂片制作和染色.pptxVIP

实验室诊断—血液学检查技能一血液样品采集与抗凝处理技能二红细胞相关性检查技能三血涂片制作和染色技能四白细胞分类计数技能五血小板计数

血涂片制备血细胞染色低倍/油镜观察,计数计算报告方式步骤1步骤5步骤2步骤3步骤4

引起血液涂片分布不均的主要原因：推片边缘不整齐速度及用力不均匀载玻片不清洁

一张良好的血片，血液分布均匀，厚薄要适宜，头体尾要明显，细胞分布要均匀，血膜边缘要整齐，对光观察呈霓虹色，并留有一定的空隙，便注明畜别、编号及日期。

血涂片制备推片载玻片血液

血涂片制备将推片匀速向前，勿停顿。涂片的厚薄取决于速度和角度：快、大(厚)。慢、小（薄）

血涂片制备一张满意的血涂片应厚薄均匀头体尾鲜明

血涂片制备涂片干燥后用铅笔在血涂片的头部写上姓名和编号

血涂片制备理想的血涂片

血细胞染色滴加染液至血膜盖满为止，染数秒，加等量中性缓冲液，轻轻摇动、混匀，再染色3～5min，温和水洗，自然干燥或吸干，镜检。染色良好的血片呈樱桃红色。①瑞氏染色法

血细胞染色甲醇固定3～5min，滴加染液至盖满整个血膜，染色30～60min，用蒸馏水冲洗、干燥、镜检。染色良好的血片呈玫瑰红色。②姬姆萨氏染色法

血细胞染色染液染数秒，加等量中性缓冲液，混匀，再染4min左右，温和水洗，吸干，镜检。③瑞氏—姬姆萨氏复合染色

血细胞染色④Diff-Quik染色剂将血涂片放入装有DiffA液的染色缸里，使血涂片完全浸入15-20s，取出。浸泡于磷酸盐缓冲液的diffB中洗掉DiffA溶液，稍甩干。再把血涂片浸泡于DiffC液中15-20s，取出；温和水洗，干燥吸干，镜检。

血涂片染色涂片干燥后加瑞氏染色Ⅰ液5-8滴覆盖整个血膜1分钟。勿冲洗再加瑞氏染色Ⅱ液5-8滴后将Ⅰ液和Ⅱ液充分混匀静置10分钟。

血涂片染色直接流水冲洗3-5分钟（切勿先倒掉染液）。涂片经水洗后，干燥备用。

镜检

镜检先用低倍镜做大体观察，如染色合格，再换用油镜计数，通常在血片的一端或中心进行计数。

镜检有顺序地移动血片，计数白细胞100～200个白细胞总数在1万个／1mm3以下计数100个；在2万个／mm3以下计数200个；在2万个／mm3以上计数400个。

低倍镜观察染色情况(满意、偏酸、偏碱）细胞分布情况血涂片的观察油镜下分类计数油镜分类时应按一定走向，不要重复计数。

正常红细胞呈双凹圆盘形，血涂片中见到圆形，大小较一致，直经6-9um，平均7.5um，边缘部厚度约2um，中央约为1um，染色后四周呈浅桔红色，中央呈淡染区（又称中央苍白区）约占RBC直径的1/3-2/5。

红细胞形态异常的临床意义红细胞大小不均，中央区苍白，大的红细胞增多见于营养不良性贫血。中央淡染区扩大，小的红细胞数量多，见于缺铁性贫血。红细胞形态呈现梨形，见于重症贫血。

红细胞形态异常的临床意义呈串钱状，见于炎症和肿瘤性疾病。体积变小着色暗，缺乏中央凹陷，见于自身免疫性溶血性贫血。红细胞内含有蓝黑色大小不等的颗粒为铅中毒的特征性。

犬血涂片，RBC呈串钱状形态

溶血性疾病犬血涂片

再生性贫血犬血涂片

小焦虫（B.gibsoni）的血液抹片

大焦虫（B.canis）的血液抹片

猫贫血临床检查病猫可表现中度到明显的活动减少或对运动的耐受性降低，或为中度或严重的呼吸次数增加，常表现异嗜癖。

猫贫血临床检查病猫可表现中度到明显的活动减少或对运动的耐受性降低，或为中度或严重的呼吸次数增加，常表现异嗜癖。查体常见黏膜苍白，呼吸加快，可闻及轻微的心脏收缩杂音，心动过速及孱弱。

临床检查检查患贫血症的病猫时，应特别注意外周淋巴结和脾脏的大小。引起贫血的肿瘤、感染及免疫性疾病常常可导致这些器官肿大。

贫血检查确定贫血是再生性或非再生性。

贫血检查引起再生性贫血的原因包括三类：失血溶血局部血管内血量增加

贫血检查非再生性贫血主要由红细胞的产生减少所致。骨髓疾病或继发于髓外疾病。

贫血的常见原因失血寄生虫病，例如钩虫、跳蚤和蜱虫?胃肠道溃疡，例如肿瘤和炎症慢性血尿，例如移行细胞癌严重血小板减少症凝血障碍（少见）?

贫血的常见原因炎性疾病感染：立克次氏体、真菌和病毒?免疫介导性疾病?肿瘤失血和炎性疾病并存?

贫血的少见原因门静脉短路(PSS)?缺铁性日粮肠道铁吸收减少亚洲犬种小红细胞症?

缺铁性贫血的血涂片

网织红细胞计数