动物细胞与组织培养干细胞课件.pptVIP

华侨大学生物工程系刘建福1胚胎干细胞造血干细胞神经干细胞间充质干细胞

华侨大学生物工程系刘建福2干细胞的有关特性一、形态和生化特征形态上通常呈圆形或椭圆形、体积小、核质比例较大干细胞具有较高的端粒酶活性，具有较强的增殖能力二、增殖缓慢性－－利于细胞对特定的外界信号作出反应，以决定进行增殖还是进入特定的分化程序。还可减少基因发生突变的可能性。自稳性－－干细胞自我更新维持自身数目的恒定。这是干细胞区别于肿瘤细胞的本质特征。

华侨大学生物工程系刘建福3干细胞（stemcell）是一类具有自我复制能力（self-renewing）的多潜能细胞，它可以分化成多种功能细胞。根据其发育阶段，可以分为胚胎干细胞和成体干细胞。根据其分化潜能的大小，可分为：①全能干细胞。它具有形成完整个体的分化潜能，可以无限制地增殖，能分化成成体的200多种细胞类型，从而可以形成任何组织和器官。胚胎干细胞属于此类。②多能干细胞。它具有分化成多种细胞组织的潜能，但却失去了发育成完整个体的能力，如间充质干细胞。③定向干细胞。只能向一种或密切相关的细胞类型分化，如造血干细胞和神经干细胞等。三、分化潜能与干细胞的种类

华侨大学生物工程系刘建福4干

细

胞

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华侨大学生物工程系刘建福6干细胞的分裂

华侨大学生物工程系刘建福7正常干细胞发育

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华侨大学生物工程系刘建福9胚胎干细胞胚胎干细胞包括ES细胞（embryonicstemcell）和EG细胞（embryonicgermcell）。ES细胞：当受精卵分裂发育至囊胚期，胚胎细胞在囊胚腔内成团存在，称为内细胞团（innercellmass）。将细胞团的细胞分离出来进行培养，在一定条件下这些细胞可在体外“无限期”地增殖传代，同时还保持其全能性。EG细胞是由原始生殖细胞（primordialgermcell,PGC）培养分离得到。ES是一种高度分化细胞，具有发育的全能性，能分化出成体动物的所有组织和器官，包括生殖细胞。ES细胞可以在体外培养成为永久性细胞系，人们可以在体外对其进行各种遗传操作，通过核移植技术生产转基因动物。

华侨大学生物工程系刘建福10胚胎干细胞

华侨大学生物工程系刘建福11胚胎干细胞（embryonicstemcell，ES）是已知的分化潜能最广的一类干细胞。胚胎干细胞的研究历史可以追溯到1958年，Stevens等将小鼠附植体胚胎异位移植到肾脏的被膜下，得到一种能够连续传代的多潜能细胞系，称为胚胎癌细胞（embryoniccarcinomacell）或畸胎瘤（teratocarcinomacell），简称EC细胞。胚胎干细胞系建立于1981年。英国剑桥大学的Evans和Kaufman，美国加州大学的Martin分别成功地分离和体外培养了小鼠的胚胎干细胞。此后，一系列其它动物的胚胎干细胞相继分离和建系，如金黄地鼠、大鼠（1988）、猪（1990）、牛（1992）、水貂和兔（1993）等。1995年Thomson等从恒河猴的囊胚中分离建立了世界上第一株灵长类动物的胚胎干细胞。胚胎干细胞的研究概况

华侨大学生物工程系刘建福121998年他们在建立灵长类胚胎干细胞取得成功的经验基础上，从接受不孕症治疗的夫妇所捐赠的处于囊胚阶段的早期胚胎中分离出人的ES细胞。同年，Gearhart从选择性流产所得到的胚胎生殖腺中分离出人的EG细胞。2000年，澳大利亚的Reubinoff和新加坡的体外受精专家合作，又成功地从人胚泡中建立了8株未分化的人胚胎干细胞，并在体外分化实验中成功地得到了神经干细胞。

华侨大学生物工程系刘建福13胚胎干细胞的生物学特征：a．形态学特征在培养基中，圆形或卵圆形的细胞单层或多层堆积，呈岛状或巢状，细胞界限不清楚；细胞体积小，核大，胞浆少，有一个或多个核仁。b．发育全能性标志具有发育阶段特异性胚胎抗原（stage-specificembryonicantigen，SSEA）；碱性磷酸酶（AKP）活性较高；OCT-4基因表达，OCT-4基因是一种发育全能性的标志基因；端粒酶活性很高。

华侨大学生物工程系刘建福14胚胎干细胞的生物学特性（P142－143）1ES细胞形态结构与核型2ES细胞的生长特性3ES细胞的高度分化潜能

华侨大学生物工程系刘建福15ES细胞的全能性表现：1形成畸胚瘤，将ES细胞注入同源动物皮下可形成畸胚瘤，包括三个胚层细胞。2形成类胚体，将ES细胞在非黏附底物中悬浮培养生长，或控制增殖细胞数目，能够生成类胚体，是一个与畸胚瘤相似的多种系混杂的集合体，具有