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基于蛋白质组学解析枯草芽孢杆菌高表达PGA的分子机制与调控网络

一、引言

1.1研究背景

枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis）作为一种重要的原核表达宿主，在生物技术领域展现出巨大的应用价值。它是一种土壤来源的低G+C、内生孢子革兰氏阳性细菌，具有培养简单快速、分泌蛋白质能力强、非致病性以及良好的发酵基础和生产技术等诸多优点，被广泛应用于各种工业用酶，如淀粉酶、蛋白酶和脂肪酶等的生产，是微生物研究领域中的重要模式菌株。

与传统的大肠杆菌表达系统相比，枯草芽孢杆菌表达系统优势显著。其非致病性使其安全程度达到食品级，可用于食品和医药领域的生产；强大的蛋白质胞外分泌能力，约有300多种蛋白质可直接分泌至胞外，简化甚至可去除部分目的蛋白的纯化步骤；表达的蛋白质产物不容易形成包涵体，避免了因包涵体导致的蛋白质不可溶及难以分离纯化的问题；作为好氧嗜温菌，培养周期短，生长速度快，发酵所需的培养基配方简单，发酵技术成熟，易实现工业化应用。

然而，枯草芽孢杆菌表达系统也存在一些亟待解决的问题。尽管模式菌株的全基因组测序已完成，但仍有近50％基因的功能尚不明确；自然界中能自发形成感受态细胞状态的菌株较少，感受态持续时间短，转化效率低，转化方法针对性较强；内部存在限制性修复系统，重组质粒易不稳定，造成质粒丢失；自身胞外蛋白酶表达能力强，可能引起目的蛋白降解；拷贝数通常较低，蛋白