骨髓基质成骨细胞片层技术构建组织工程骨研究.pdfVIP

骨髓基质成骨细胞片层工程：

无需生物降解支架重建组织

在组织工程骨的构建中，细胞的存在、迁移、增殖和代谢与成功构建

组织工程骨密切相关。体外细胞增殖是获得组织工程细胞的主要方法。根

据细胞抑制和密度抑制原理，当细胞接触时，细胞将停止。此外，细

胞与支架材料的结合通常通过细胞悬液接种实现。本研究提出了一种新的构建

骨髓基质成骨细胞聚合物的方法——骨髓基质成骨细胞片层技术。主要步骤包

括：从骨髓中提取骨髓基质干细胞，进行体外增殖，并诱导其成为骨髓基质成

骨细胞。在体外构建了骨髓基质成骨细胞片层，评估了其形成基质的能力，并

检测了骨髓基质成骨细胞片层的组织学特征。

1材料和方法

1.1材料

新西兰兔（第四实验动物），Dulbecco’s

ModifiedEagle(DMEM)培养液（Gibco），胎牛(FBS)（杭

州四季青生物技术公司），胰蛋白酶（Sigma），L‑抗坏血酸（Sigma），谷

氨酰胺（Sigma），β‑磷酸甘油钠（Sigma），地塞（Sigma），BALP检

测试剂盒（建成生物工程）。

1.2仪器

电子天平（METTLERAE200），CO细胞培养箱（Forma），YJ‑875

2

超净工作台（苏州净化设备厂），倒置显微镜及摄影系统（Olympus），离心

机（德国HeraeusCryofuge8000），X射线光谱分析仪（OXFORD公

司的LinkISIS系统），扫描电子显微镜（SEM；日立公司的S3400N），

紫外分光光度计型号UV‑2201（岛津）.

1.3方法

1.3.1兔骨髓干细胞（BMSCs）的培养

选取出生1周的5只新西兰兔（不分）。在无菌条件下，取四肢长骨的干骺

端，切成1mm×1mm的小块，并用含10%FBS的DMEM培养液冲洗。经过轻

柔搅拌置后，获得细胞悬液，并接种到培养皿中。24小时后更换培养液并

去除未贴壁的血细胞，每3天更换一次培养液。当培养皿底部细胞长满时，

常规使用0.25%胰蛋白酶进行传代。

1.3.2兔骨髓基质成骨细胞（BMSO）的培养

Bonemarrowstromalosteoblastcellsheetengineering:

Recreatingtissueswithoutbiodegradablescaffold

Theexistence,migration,proliferationandmetabolismofcellseedsintissue

engineeringbonearerelatedtothesuccessofconstructionoftissueengineeringbone.

Theproliferationofcellsinvitroisthemainmethodtogetcellseedsintissue

engineering.Thecelldivisionwillceasewhencellcontactundertheprincipofcell

inhibitionanddensityinhibition.Furthermore,thecombinationofcellseedsand

scaffoldmaterialsisinoculatedbycellsuspension.Inthisstudy,weproposedanew

methodforconstructingbonemarrowstromalosteoblastcellpolymers—bone

marrowstromalosteoblastcellsheettechnique.Themainproceduresare:the

extractionofbonemarrowstromalstemcell