JJF(晋)60-2021实时荧光定量聚合酶链反应分析仪校准规范.docxVIP

JJF（晋）59-2021

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本规范主要起草人：

管立江（大同市综合检验检测中心）任小虎（大同市综合检验检测中心）宋亚琳（大同市综合检验检测中心）

参加起草人：

王芬（大同市综合检验检测中心）姚文军（大同市综合检验检测中心）

薛诚（北京林电伟业电子技术有限公司）闫闻（大同市综合检验检测中心）

JJF（晋）59-2021

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目录

引 言 II

范围 1

引用文件 1

术语 1

概述 3

计量特性 3

校准条件 4

校准项目和校准方法 5

校准结果表达 11

复校时间间隔 11

附录A荧光定量PCR仪校准原始记录参考格式 13

附录B荧光定量PCR仪校准证书内页参考格式 16

附录C温度偏差和阈值循环数示值误差测量结果的不确定度评定示例 17

引言

本规范依据JJF1001-2011《通用计量术语及定义》、JJF1071-2010《国家计量校准规范编写规则》起草，其中测量不确定度的评定按照JJF1059.1-2012

《测量不确定度评定与表示》进行。

本规范采用了JJF1527-2015《聚合酶链反应分析仪校准规范》、YY/T1173-2010《聚合酶链反应分析仪》相关术语定义和技术内容。

本规范为首次制定。

JJF（晋）59-2021

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实时荧光定量聚合酶链反应分析仪校准规范

范围

本规范适用于实时荧光定量聚合酶链反应分析仪的校准。

引用文件

YY/T1173-2010《聚合酶链反应分析仪》

JJF1527-2015《聚合酶链反应分析仪校准规范》

JJF1101-2019《环境试验设备温度、湿度参数校准规范》

凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本规范；不注日期的引用文件,其最新版(包括所有的修改版)适用于本规范。

术语

聚合酶链反应

聚合酶链反应是一种对特定的DNA或RNA片段在体外进行快速扩增的方法，由变性-退火-延伸三个基本反应步骤构成。[YY/T1173-2010，术语和定义3.1]

聚合酶链反应分析仪

基于聚合酶链反应（PCR）技术原理，模拟DNA或者RNA的复制过程，在模板、引物、聚合酶等存在的条件下，特异扩增已知序列，对其进行检测分析的仪器设备。[YY/T1173-2010术语和定义3.2]

实时荧光定量聚合酶链反应分析仪

可以实现DNA或者RNA的扩增，并根据PCR过程中荧光染料释放的荧光强度的变化对扩增产物量进行定量分析的仪器设备。

温度偏差

在温度参数校准循环程序中，实时荧光定量PCR分析仪均热块设定温度与所有采样测量孔温度平均值之差。

温度均匀度

在温度参数校准循环程序中，实时荧光定量PCR分析仪均热块所有采样测量孔温度平均值的最大值与最小值之差。

温度最大过冲量

在温度参数校准循环程序中，荧光定量PCR仪均热块温度升高或降低至设定值过程中，所有采样测量孔温度超出设定值的最大幅度。

平均升温速率

在温度参数校准循环程序中，实时荧光定量PCR仪均热块升温过程中，所有采样测量孔单位时间上升的平均温度值。[YY/T1173-2010术语和定义3.4]

平均降温速率

在温度参数校准循环程序中，实时荧光定量PCR仪均热块降温过程中，所有采样测量孔单位时间下降的平均温度值。[YY/T1173-2010术语和定义3.5]

荧光染料

短波长激发光激发后，能够释放出可见光的试剂。[YY/T1173-2010术语和定义3.12]

荧光强度精密度

均热块测量孔在同一荧光条件下荧光强度重复测量值的一致性。[YY/T1173-2010术语和定义3.14]

阈值循环数

均热块测量孔内的荧光信号到达指数扩增时经历的循环周期数。主要的计算方式是以扩增过程前3到15个循环的荧光值的10倍标准差为阈值，当荧光值超过阈值时的循环数则为阈值循环数。[YY/T1173-2010术语和定义3.15]

阈值循环数精密度

均热块测量孔在同一荧光条件下阈值循环数重复测量的一致性。

熔解温度

全总DNA双螺旋结构降解一半时的温度称为熔解温度。

熔解曲线

PCR过程中均热块测量孔的荧光强度（纵坐标）与温度（横坐标）形成的曲线。

熔解温度漂移

实时荧光定量PCR仪校准时，根据熔解曲线计算的熔解温度值与光学模拟器熔解温度设定值之差。

峰值强度

熔解曲线上熔解温度对应的荧光强度。

通道峰值强度一致性

熔解曲线上，所