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热考提升练(五)基因工程的操作过程及应用

1．在乙肝病毒(HBV)的结构蛋白中，用来制备疫苗的主要是HBsAg蛋白。目前HBsAg基因已在生物体系中成功表达。下图表示用农杆菌转化法培育转基因番茄，生产乙肝疫苗的技术路线，请回答下列问题：

(1)利用PCR获取HBsAg基因片段时，需要用到________________酶，还需要根据HBsAg基因的序列合成下列四种引物中的______(填字母)。

(2)基因工程的核心步骤是______________________________________。

图中过程①需要用到的限制酶是____________________，这样可以保证__________________________________________________________。

(3)利用植物组织培养技术将转基因番茄细胞培育成试管苗的过程中，培养基中需要加入__________________以诱导番茄细胞脱分化和再分化，还需要加入____________以筛选出导入了HBsAg基因的受体细胞。用该植株结出的番茄果实饲喂小鼠，若在小鼠的血清中检测到__________，则说明该转基因乙肝疫苗口服时有效。

解析：(1)利用PCR扩增目的基因片段时，需要耐高温的DNA聚合酶，即TaqDNA聚合酶。耐高温的DNA聚合酶从引物的3′端开始延伸DNA链，因此要扩增目