高通量基因芯片实验原理与应用.pdfVIP

基因芯片

1.实验原理

基因芯片的测序原理是杂交测序方法，即通过与一组已知序列的核酸探针杂交进行核酸

序列测定的方法。在一块基片表面固定了序列已知的八核苷酸的探针，当溶液中带有荧光标

记的核酸序列，例如TATGCAATCTAG，与基因芯片上对应位置的核酸探针产生互补匹配时，

通过确定荧光强度最强的探针位置，获得一组序列完全互补的探针序列。据此可重组出靶核

酸的序列。

图1.1基因芯片的测序原理图

2.实验目的

基因功能的研究。通过基因芯片可以大规模，高通量地对成千上万个基因进行同时研究。

3.实验材料

3.1.主要试剂

硅片或玻片，核酸探针，尼龙膜，硝酸纤维膜等。

3.2.主要仪器

PCR仪等、激光共聚焦显微镜等。

4.实验步骤

4.1.样品的准备

由于灵敏度所限，多数方法需要在标记和分析前对样品进行适当的扩增。

4.2.杂交检测

显色和分析测定方法主要为荧光法，其重复性较好，但灵敏度较低。目前正在发展的方

法有质谱法、化学发光法、光导纤维法等。以荧光法为例，当前主要的检测手段是激光共聚

焦显微扫描技术，以便于对高密度探针阵列每个位点的荧光强度