葡聚糖凝胶柱层析专业知识讲座.ppt

带电荷物质在电场中向相反电极移动的现象称为电泳。

各种核苷酸在pH3.5的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲溶液中电离差异，带有不同的净电荷，在电场中的迁移率不一样，从而达到分离的目的。;1、水平电泳仪、水平电泳槽、紫外检测仪、电吹风、

醋酸纤维膜。

2、0.02mol/L柠檬酸缓冲液(pH3.5)：取柠檬酸(C6H807.H20)16.2g，柠檬酸三钠(Na3C6H507.2H20)6.7g。用蒸溜水溶解，定容到2000ml。

3、腺苷酸溶液：AMP、ADP、ATP，用水配成50mg/ml。;三、实验步骤：;6、盖上电泳槽的盖子，平衡10分钟.

7、接上电极，点样端在负极，接通电源，调整电压在100V，室温通电40分钟。

8、电泳完毕后，关闭电源，取出滤纸，电吹风吹干。

9、在紫外灯下观察，可见核苷酸的深蓝色斑点。;画出核苷酸在醋酸纤维膜上的位置，并分析其分离依据。;实验1-2SephadexG-50分离生物大分子;1、凝胶层析法的原理：;;总体积：Vt(totalvolume)，

外水体积：Vo(outervolume)

内水体积：Vi(innervolume)

洗脱体积：Ve(elutionvolume)

干胶体积：Vg(gelvolume)

Vt（床体积）=Vo+Vi+Vg,

Ve（洗脱体积=Vo+K