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生物科技发展与应用手册

第1章基因编辑与精准医疗

1.1CRISPR-Cas9技术原理与应用流程

CRISPR-Cas9系统由两大部分组成：向导RNA（gRNA）和Cas9核酸酶。gRNA包含约20个碱基的靶向序列，负责识别基因组中的特定DNA位点，而Cas9则是一种源自细菌的分子剪刀，在gRNA引导下解开双链DNA，造成单链断裂（Double-StrandBreak,DSB）。一旦DNA双链断裂，细胞会启动修复机制。其中非同源末端连接（NHEJ）途径最为常用，它会导致插入或缺失突变（Indels），从而精准敲除基因或产生移码突变，这是基因编辑的核心步骤。

为了获得精确的碱基替换，科学家常采用同源定向修复（HDR）途径，该过程需要引入一段与目标基因上下游序列同源的修复模板。系统会利用这条模板指导正确的碱基替换，实现点突变或小片段插入。在应用层面，CRISPR-Cas9可用于基因敲除（Knockout）以研究基因功能，也可用于基因敲入（Knock-in）以引入外源基因或修复致病突变。例如，在mice模型中，敲除小鼠的Cd34基因可模拟人类CD34阴性细胞，用于研究造血干细胞分化。针对大型基因缺失（LargeDeletion），传统HDR效率极低，因此研究人员开发了基于CRISPR的碱基编辑器（BaseE