细胞骨架蛋白免疫荧光染色.pptxVIP

【试验目标】

熟悉荧光显微镜原理及使用方法。

掌握荧光染料染色方法并观察其发出荧光。

掌握免疫荧光细胞化学染色法原理及操作步骤。

掌握用间接免疫荧光细胞化学染色法显示当前抗原方法。;【试验原理】

细胞骨架是维持真核细胞形态及参加一系列细胞生物学功效主要细胞器，微丝属于其中主要组员，其中又以肌动蛋白（actin）纤维作为主要成份。细胞中肌动蛋白以网络状分布于胞质中，大多数细胞均呈高表示。采取人actin或tubulin单克隆抗体结合该抗原，再使用FITC和Rhodamine标识山羊抗小鼠二抗与一抗结合，最终细胞中绿色或红色荧光显示了目标抗原存在。;【试验准备】

1、材料体外培养人肺癌细胞飞片。

2、试剂0.01MPBS溶液（pH7.4）：NaCl8.0g，KCl0.2g，NaH2PO41.15g，KH2PO40.2g，蒸馏水定容至1000mL；抗体稀释液（含BSA）；并甲醇或冰丙酮；5%正常山羊血清封闭液；0.5mol/LpH9.5碳酸盐缓冲液：NaHCO33.7g，Na2CO30.6g双蒸水800mL；碱性缓冲甘油溶液：碳酸缓冲液1份与甘油（试剂级，无荧光）9份混合均匀；小鼠抗人actin单克隆抗体；FITC或Rhodamine标识山羊抗小鼠二抗。

3、仪器等超净工作台，CO2培养箱，倒置相差显微镜，科学级荧光显微镜，冰箱，微量加样器，移