PEDVCOE蛋白单克隆抗体的制备和可变区测序.docxVIP

摘要

本研究旨在展现猪流行性腹泻病毒（PEDV）的核心中和抗原表位COE蛋白，并对其免疫特性进行深入剖析，从而为PEDV的有效检测及亚单位疫苗的研发铺设基石。我们先将PEDV的COE基因序列嵌入进pcDNA3.1+中，成功制备出pcDNA3.1-COE，并转染至HEF293K细胞进行表达。采用Ni-NTA亲和柱纯化蛋白。然后将纯化的蛋白联合弗式佐剂，对BALB/c小鼠进行体内接种免疫，将小鼠的脾细胞和SP2/0细胞通过杂交瘤细胞技术巧妙的完成细胞融合，采用酶联免疫吸附法对单克隆抗体进行效价测定，其中多种基因型PEDV毒株表现出交叉反应性，进一步用RT-PCR扩增单克隆抗体的轻重链可变区基因，