高考生物：基因工程与蛋白质工程知识与实例分析.docxVIP

一、知识考点

（一）基因工程的操作步骤

1、目的基因的筛选与获取

（1）筛选方法：从相关已知结构和功能清晰的基因中筛选

（2）获取与扩增方法：PCR获取与扩增

①PCR（聚合酶链式反应，需要在一定的缓冲溶液中进行）：

原理：DNA半保留复制原理

步骤：a.变性：目的基因DNA受热变性后解为单链，温度为94℃，5min

b.复性：引物与单链相应互补序列结合，温度为55℃

C.延伸：以单链DNA为模板，在TaqDNA聚合酶作用下延伸，温度为72℃

基本条件：DNA模板、4种脱氧核苷酸、2种引物、耐高温DNA聚合酶等

②PCR产物鉴定方法：琼脂糖凝胶电泳鉴定，在凝脂胶中DNA分子的迁移速率与凝胶的浓