Promega-双萤光素酶报告基因.pptVIP

; 自然界的萤光 ;发光鱼 发光甲虫;萤火虫;细胞信号转导途径

启动子/增强子

受体结合

病毒/细胞相互作用

转录因子

药物诱导作用或”效果”;荧光-Fluorescence

萤光-Luminescence;萤光

（Bioluminescence）;报告基因;非放射性

检测快（比CAT等）

灵敏度高（可比CAT检测灵敏度高100倍）

半衰期短（在理想条件下，可检测到10-20摩尔的萤光素酶分子。在哺乳动物细胞中半衰期3小时，在植物细胞中半衰期3.5小时。而CAT在哺乳动物细胞中的半衰期约50小时）

线形范围广（在10-16M(10pg/L)至10-8M(1mg/L)范围内,光强度与萤光素酶浓度成正比）

一般比显微镜检测的荧光更灵敏(对多孔板而言)

生物萤光比荧光更稳定,因为自然界进化的酶能保护光子发射器

通过基因工程可以延伸生物萤光的性能和能力

;原理:

制备含有luc/Rluc的DNA

转染

提供刺激

测量萤光

;外界刺激(导引物);“碰撞启动子”:

全序列:

2)逐步缺失:

;FireflyandRenilla;萤光素;Coelenterazine;Firefly;报告基因A(首要信号);细胞可能有内源脱乙酰基酶?-Gal或GUS活性.

CAT,?-Gal和GUS检测是终点检测.

不能同时对在一个管