荧光定量实验设计及优化.pptVIP

荧光定量实验设计及优化;（优选）荧光定量实验设计及优化;*;标记 淬灭基团采用无荧光背景的如BHQ,不要用tamra

PCR产物长度 50－150bp

Design primerdesignsoftware，选择序列保守区域

如果保守区域太短，可以在引物中考虑引入LNA提高Tm

探针可以考虑引入LNA或改用MGB或自淬灭taqman探针

简并引物或探针需要同时考虑多种情况下的Tm高低

纯化与否 PAGE/HPLC

;SNP的Taqman双色检测中，突变探针一般Fam标记

相对定量分析中内参基因一般Hex标记

(例如Roche的UPL相对定量解决方案)

对检测要求更高的建议Fam标记(灵敏度或者定量vs定性)

扩增效率较差的建议Fam标记

;ReactionConditions

PrimersandProbes;PCR的建立与优化;建立新的PCR体系:

GeneralHints;StandardCondition