2025年医疗行业检验科检验师微生物检测分析手册.docxVIP

2025年医疗行业检验科检验师微生物检测分析手册

第1章微生物培养与分离鉴定技术

1.1常规培养基配制与筛选策略

配制含有蛋白胨、酵母提取物和氯化钠的基础培养基（如LB培养基），将10g蛋白胨、5g酵母提取物溶于1L蒸馏水中，加入10gNaCl调节至3.5g/L，在40℃下搅拌30分钟，待溶液澄清透明后，分装至250mL锥形瓶中，每瓶加入10mL无菌水，在121℃高压灭菌15分钟，冷却至50℃以下后迅速分装，-20℃冰箱保存备用。针对革兰氏阴性菌（如大肠杆菌），选用营养琼脂平板，将10g营养琼脂溶于1L蒸馏水中加热至115℃，分装后121℃高压灭菌15分钟，冷却至50℃后分装；针对革兰氏阳性菌（如金黄色葡萄球菌），选用血琼脂培养基，将10g血琼脂溶于1L蒸馏水中，加入10mL5%牛血清，分装后56℃恒温培养18小时，再经121℃高压灭菌15分钟。

在45℃水浴锅中预热琼脂平板，将已分装的培养基倒入平板表面，利用无菌移液枪头将培养基均匀涂抹成直径约40mm的圆形，再在平板表面快速覆盖一层无菌石蜡油或凡士林，形成无菌隔离层，防止杂菌污染，冷却凝固后放入37℃恒温培养箱48小时。观察平板表面形态，革兰氏阴性菌通常呈现圆形、边缘整齐、有透明晕圈（如大肠杆菌），革兰氏阳性菌