目的基因克隆方法与实际应用指南.pdfVIP

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一、目的基因克隆的策略有哪些？其理论依据什么？如何根据具体条件，如目的

性状的特点，已知控制目的性状的基因的信息合理选择基因克隆的方法？

1、主要有以下几个克隆的策略：

略克隆目的基因的方法有哪些各有什么特点如何解决其中的假阳性克隆问题扩增这种方法专一性强但是操作过程比较麻烦特别是很不稳定生存时间短所以要求的技术条件较高差异显示技术该方法以和凝胶电泳为基础实验简便灵敏度高耗时短可同时比较多个样品间基因表达的

（1）PCR法分离目的基因：从蛋白质的一级序列分析得到核酸序列的相关信息，

设计简并引物，通过对mRNA进行反转录得到cDNA，以cDNA为模板，然后

将目的基因通过PCR方法扩增，或者直接从基因组DNA扩增的方法。

（2）核酸杂交的方法：通过对蛋白质的氨基酸序列分析，设计简并引物，通过

核酸杂交的方法从基因文库中筛选得到目的基因。

（3）免疫学筛选法分离目的基因：利用免疫学原理，通过目的蛋白的特异抗体

与目的蛋白的专一结合，从表达文库中分离目的蛋白基