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基因检测与精准医疗应用手册（执行版）

第1章基因检测技术原理与前沿

1.1DNA序列分析与变异识别技术

DNA序列分析的核心在于利用高通量测序技术将DNA双螺旋结构解离为单链，通过引物结合位点的特异性扩增，将目标基因片段转化为可检测的核苷酸序列信号。在临床实践中，常采用Sanger测序法作为金标准，其原理是利用链终止法，在特定碱基位置引入荧光标记的dNTP，当测序仪读取序列时，若遇到与引物互补的模板链，dNTP无法结合，导致链终止，从而直接读出目标区域100-1000个碱基的精确序列。变异识别技术则聚焦于通过比对参考基因组，识别序列中非预期的单核苷酸变异（SNV）、插入或缺失（Indel）以及结构变异。以常见的致病突变为例，若患者基因A在编码区第583位发生G到A的点突变，测序仪读取到的序列为GAA而非预期的GAG，这种碱基组成的改变即被识别为错义突变，可能直接导致蛋白质功能丧失。

针对大片段缺失或重复序列的变异，传统Sanger测序存在盲区，因此需结合二代测序（NGS）技术进行全基因组或全外显子测序。例如，在筛查脊髓性肌萎缩症（SMA）时，若患者基因15号出现15个碱基的缺失，NGS能精准定位缺失起始点和终止点，而Sanger测序因读长限制往往只能检测到缺失末端的最后一个碱基，无法确诊。变异识别还涉及拷贝