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酪胺含量实验测定方法

一、高效液相色谱法（HPLC）

高效液相色谱法是目前测定酪胺含量最常用的方法之一，具有分离效率高、分析速度快、检测灵敏度高的特点，适用于多种基质中酪胺的定量分析。

（一）样品前处理

提取

根据样品基质的不同，提取方法有所差异。对于液态样品如葡萄酒、酱油等，可直接取一定量样品，加入适量的偏磷酸溶液（0.1mol/L）或三氯乙酸溶液（5%）进行蛋白沉淀，涡旋混合后，以8000r/min的速度离心10分钟，取上清液过0.22μm有机滤膜，待上机分析。对于固态样品如奶酪、香肠等，需先进行均质处理。准确称取5-10g样品于均质杯中，加入20-50mL的5%三氯乙酸溶液，均质1-2分钟，使样品充分分散，然后转移至离心管中，8000r/min离心15分钟，取上清液。若样品中脂肪含量较高，可加入正己烷进行液液萃取，去除脂肪层，再取下层水相进行后续处理。

净化

为减少基质干扰，提高检测的准确性，提取液常需进行净化处理。常用的净化方法包括固相萃取（SPE）和分散固相萃取（d-SPE）。固相萃取常选用阳离子交换柱，如SCX柱。依次用甲醇、水活化柱子，然后将提取液上样，用甲醇淋洗去除杂质，最后用5%氨化甲醇溶液洗脱酪胺，收集洗脱液，氮气吹干后，用初始流动相定容至1mL，过膜后上机。分散固相萃取则是向提取液中加入适量的净化剂，如C18、PSA、GCB等，涡旋混合后离心，取上清液上机。净