第5讲PCR技术基本原理及应用(研究生课程).pptVIP

第五章PCR技术及原理（4学时）;KaryMullis

researchscientistinthe1980sataCaliforniabiotechnologycompanycalledCetus

co-winnerof1993NobelPrize;各种型号的PCR仪;聚合酶链式反应

（PCR：PolymeraseChainReaction);PCR技术基础：体内DNA的复制;5?;Cycle3;PCR产物以指数形式增加，即Y=2n

(n为循环次数);PCR扩增的平台效应（plateaueffect）;

是不是cycles

越多越好？;模板DNA

特异性引物

耐热DNA聚合酶

dNTPs

Mg2+;三、PCR的反应步骤;

根据PCR反应，能否设计一个简易PCR仪？;简易的PCR反应;四、PCR技术的特点;1、高度的灵敏性;2、高度的特异性;

所谓特异性：只扩增引物之间的DNA！;（1）在高度保守区,与非扩增区无同源性。

（2）引物长度以15-40bp为宜。

（3）碱基尽可能随机分布,G+C占40-60%。

（4）引物内部避免形成二级结构。

（5）两引物间避免有互补序列。

（6）3’端为关键碱基；5’端无严格限制