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酪蛋白含量实验测定方法

一、凯氏定氮法

凯氏定氮法是测定蛋白质含量的经典方法，通过测定样品中氮的含量，再乘以蛋白质换算系数来计算酪蛋白含量，适用于各类乳制品及含酪蛋白食品的测定。

（一）实验原理

蛋白质是含氮的有机化合物，将样品与浓硫酸和催化剂一同加热消化，使蛋白质分解，其中碳和氢被氧化为二氧化碳和水逸出，而样品中的有机氮转化为氨与硫酸结合生成硫酸铵。然后加碱蒸馏，使氨游离，用硼酸溶液吸收后，再用盐酸标准溶液滴定，根据酸的消耗量乘以换算系数，即可计算出样品中蛋白质的含量。由于酪蛋白的含氮量约为15.67%，因此换算系数通常为6.38（1/0.1567）。

（二）试剂与材料

浓硫酸：分析纯，密度为1.84g/mL。

硫酸铜：分析纯，作为催化剂，加快消化速度。

硫酸钾：分析纯，提高溶液的沸点，使消化更彻底。

氢氧化钠溶液：400g/L，用于蒸馏时碱化消化液，使氨游离出来。

硼酸溶液：20g/L，作为吸收液，吸收蒸馏出的氨。

盐酸标准溶液：0.1mol/L，用于滴定吸收氨后的硼酸溶液，需用基准物质进行标定。

混合指示剂：由1份0.1%甲基红乙醇溶液与5份0.1%溴甲酚绿乙醇溶液临用时混合而成，也可用2份0.1%甲基红乙醇溶液与1份0.1%次甲基蓝乙醇溶液混合。

样品：液态奶、奶粉、奶酪等含酪蛋白的样品，需根据样品状态进行预处理。

（三）仪器与设备

凯氏定氮仪：包括消化装置、蒸馏装置和吸收