实验-大蒜细胞SOD的提取和分离.docVIP

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实验五大蒜细胞SOD的提取和活力测定

一、实验原理

超氧化物歧化酶（SOD）是一种具有抗氧化、抗衰老、抗辐射和消炎作用的药用酶。它可催化超氧负离子（O2-）进行歧化反应，生成氧和过氧化氢。大蒜蒜瓣和悬浮培养的大蒜细胞中含有较丰富的SOD，通过组织或细胞破碎后，可用pH7.8磷酸缓冲液提取出。由于SOD不溶于丙酮，可用丙酮将其沉淀析出。

SOD酶活性测定原理：核黄素在有氧条件下能产生超氧自由基负离子O2.－，当加入氮蓝四唑（NBT）后，在光照条件下，与超氧自由基反应生成一种蓝色物质，在560nm波长下有最大吸收。当加入SOD时，可以使超氧自由基与H+结合生成H2O2和O2，从而抑制了NBT光还原的进行，使蓝色二甲月替生成速度减慢。通过在反应液中加入不同量的SOD酶液，光照一定时间后测定560nm波长下各液光密度值。

二、材料和试剂

1．提取试剂：

新鲜蒜瓣

0.05mol/L/0.1mol/L磷酸缓冲液（pH7.8）

氯仿-乙醇混合液：氯仿:无水乙醇=3:5

丙酮：用前需预冷至4-10℃

2．测活试剂：

（1）0.026mol/L蛋氨酸（Met）磷酸钠缓冲液

准确称取L-蛋氨酸（C5H11NO2S，MW=149.21）0.3879g于100mL小烧杯中，用少量0.1mol/LpH7.8的磷酸钠缓冲液溶解后，移入100mL容量瓶中并用0.1mol/