第五章固相析出分离法.ppt

?通过改变溶液条件，使溶质以固体形式从溶液中分出的操作技术。

?盐析法

?有机溶剂沉淀法

?等电点沉淀法

?结晶法;第一节盐析法(saltprecipitation);两种现象：

盐溶：低盐情况，盐离子强度的增高，蛋白质溶解度增大

盐析：高盐，盐离子强度增加，蛋白质溶解度减小;一、基本原理;原理;在盐析区，符合公式;β、KS;二、影响盐析的因素;(二）溶质（蛋白质等）种类的影响;盐析分布曲线;（三）蛋白质浓度的影响;（四）温度的影响;（五）pH的影响;三、盐析操作;;（二）盐析方法和注意事项;分部盐析法;反抽提法(RNA聚合酶);注意事项;第二节有机溶剂沉淀

(OrganicSolventPrecipitation)

;一、基本原理;一些溶剂的介电常数;?优点：

乙醇等有机溶剂易除去，产品更纯净；密度差较大，离心收集。

?缺点：

容易使蛋白质变性，操作常需低温，成本高，需防火防爆;二、影响沉淀效果的因素;（三）温度（低温沉淀）

有机溶剂存在下，大多数蛋白质的溶解度随温度降低而显著地减小。

（四）无机盐的含量

低盐：有利于沉淀，还有保护蛋白质，防止变性。

高盐：增大蛋白质在有机溶剂―水溶液中的溶解度，沉淀物中可能夹带盐。;（五）某些金属离子的助沉淀作用

多价阳离子，如Ca2+、Zn2+能与蛋白质结合形成复合物，使蛋白质溶解度降低。

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