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全外显子组测序实验测定方法

全外显子组测序（WholeExomeSequencing,WES）是一种高效的基因组分析技术，通过捕获并测序人类基因组中约1%的外显子区域，实现对蛋白质编码序列的精准解析。外显子虽仅占基因组的极小部分，却包含了约85%的已知致病突变，因此WES在遗传病诊断、肿瘤基因组分析、复杂疾病研究等领域具有不可替代的应用价值。一套标准化、高质量的WES实验流程，是确保后续数据分析准确性和生物学结论可靠性的基础。本文将详细阐述全外显子组测序从样本准备到测序完成的完整实验测定方法，为相关领域的研究人员提供技术参考。

一、样本准备与核酸提取

（一）样本类型选择

WES实验的样本类型主要包括基因组DNA（gDNA）样本和福尔马林固定石蜡包埋（FFPE）样本。gDNA样本是首选，通常来源于外周血、新鲜组织或培养细胞，这类样本的DNA完整性好、降解程度低，能够保证后续实验的稳定性和数据质量。FFPE样本则常用于临床回顾性研究，尤其是肿瘤组织样本的保存，但由于福尔马林固定过程会导致DNA发生交联、断裂和碱基修饰，对实验成功率和数据质量提出了更高的要求。此外，对于循环肿瘤DNA（ctDNA）等微量样本，需要采用更灵敏的提取和建库方法，以满足测序需求。

（二）基因组DNA提取

外周血样本提取

外周血样本通常采用EDTA抗凝管采集，采集后应在24小时内进行处理，或置于-20℃短期