2027创新设计一轮生物 高考共鸣点12　PCR引物的设计、修饰、选择与计算及限制酶、启动子的选择.pptxVIP

PCR引物的设计、修饰、选择与计算及限制酶、启动子的选择;热点;;;1.PCR引物的设计和修饰

(1)PCR引物的设计原则

①引物长度要适宜。一般引物过长会导致其延伸温度大于74℃，不适于TaqDNA聚合酶进行反应；引物过短特异性差，可导致引物与模板链随机结合。

②引物内部应避免自身互补。;③引物之间应避免互补。尤其应避免3′端的互补重叠以防形成引物二聚体(如图所示)。;(2)引物的特异性和修饰;提醒为了使经PCR扩增的目的基因能与载体正常结合，需要在2种引物的5′端添加不同的限制酶的识别序列，这是为了保证目的基因定向插入载体并可避免目的基因自身环化。;[例1]设计引物是PCR技术关键步骤之一。某同学设计的两组引物(只标注了部分碱基序列)都不合理(如图)，请分别说明理由。;[例2](2022·山东卷，25节选)为使PCR产物能被限制酶切割，需在引物上添加相应的限制酶识别序列，该限制酶识别序列应添加在引物的(填“3′端”或“5′端”)。;2.PCR引物的选择

(1)引物的结合方向

[例3]如图为X蛋白的部分基因序列，所示序列为引物结合的部分，据图分析：;解析书写引物序列，一般从引物的5′端向3′端书写，避免误判。图中位于上方的模板链5′端磷酸基团在左侧，3′端羟基在右侧，可知与上方模板链配对的引物5′端在右侧，3′端在左侧，引物序列为5′－TGATCTA