基因克隆与表达.pptxVIP

2026/06/27基因克隆与表达汇报人：分子生物学教学组

目录基因克隆技术基础目的基因获取策略载体系统与选择基因表达系统表达产物检测与纯化应用案例与前沿进展010203040506

基因克隆技术基础01

基因克隆概述基础研究药物开发基因治疗农业育种工业生产目的基因需要克隆或表达的目标DNA片段载体系统携带目的基因进入宿主的DNA分子工具酶限制性内切酶、DNA连接酶、DNA聚合酶等宿主细胞用于扩增载体或表达蛋白的生物体系

限制性内切酶与DNA连接酶类型切割特点代表酶应用场景I型切割位点远离识别位点EcoK研究用途有限II型在识别位点内或附近切割EcoRI、BamHI、HindIII基因克隆主流工具III型切割位点距识别位点一定距离EcoP15I特殊应用DNA连接酶催化DNA片段间磷酸二酯键形成的酶，实现目的基因与载体的连接II型限制性内切酶基因克隆的主流工具，识别位点内精准切割

目的基因获取策略02

PCR技术扩增目的基因94-98°C变性Step150-65°C退火Step272°C延伸Step325-35次循环次数Cycles变性退火延伸模板DNA含有目的基因的DNA样本引物与目的基因两端互补的寡核苷酸片段DNA聚合酶Taq酶、Pfu酶等耐热聚合酶dNTPs四种脱氧核糖核苷酸缓冲液提供适宜的离子环境和pH值

其他基因获取方法基因组文库筛选从构建的基因组文库中通过杂交或PC