Tn5转座酶体外技术及其在细菌遗传操作中应用.pdfVIP

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Tn5作为分子遗传学工具

体外转座及体外技术与体内转座的耦合应用

威廉・S・雷兹尼科夫、伊・Y・戈里申与杰瑞・J・里斯克

体外转座技术的发展为分子遗传学研究了多种强大工具。本章重点介

绍Tn5转座系统及其相关技术。Tn5技术尤为实用，因其转座系统需求简单、效率

高、靶标识别随机性强且稳定性佳。具体阐述体外Tn5转座在转座子

技术和嵌套片段构建中的应用，并介绍一种独特的体外/体内耦合技术——通

过电穿孔预组装的转座酶‑转座子复合物，可在多种细菌物种中生成Tn5

片段。

：Tn5；体外转座；转座子；嵌套；电穿孔转座酶

1.

引言

转座子是研究和操控组的强大工具。该技术最直接的用途是构建敲除突

变体。然而转座子诱变技术的强大之处在于：只要转座酶能通过其他方式，

位于转座子末端之间的序列可包含多种功能元件。因此这些序列可

包含：选择性标记、报告（如半乳糖苷酶）、调控元件（如可诱导启

动子）、引物结合位点、起始位点、