基因工程第四章工具酶.ppt

**.四、影响酶活性的因素:1.靶DNA的纯度：内切酶的消化底物的速率很大程度上取决于使用的DNA样品本身的纯度。通常我们从生物样品中提取出的DNA容液中，含有许多物质，如蛋白质，多糖，酚、氯仿，酒精、乙二胺四乙酸（EDTA）,SDS（十二烷基磺酸纳），高浓度的盐离子。这些都是酶活性的钝化剂。酚的影响最大，他可以使蛋白质变性，使酶失活。**.消除办法：尽量保证DNA纯度达到最大。酚抽提去蛋白；醇抽提（氯仿、异戊醇的抽提)去酚，去多糖；乙醇抽提去多元醇；沉淀（蛋白也沉，但DNA和蛋白能看的出来)；干燥去乙醇。增加酶的用量，平均每ug底物DNA的用量可达1