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6种固定液短时间固定对冰冻切片制片效果影响

在病理诊断与科研工作中，冰冻切片技术以其快速便捷的优势占据重要地位。固定作为冰冻切片制备流程中的关键环节，直接影响后续染色效果及诊断准确性。常规固定时间往往需要数小时至过夜，但在临床快速冰冻或某些特殊实验需求下，短时间固定成为常态。本文旨在探讨六种常用固定液在短时间固定条件下对冰冻切片制片效果的具体影响，为实践操作提供参考依据。

一、材料与方法

（一）实验材料

选取临床手术切除的新鲜组织样本（避免坏死、钙化及脂肪过多组织），即刻置于冷冻托盘中，添加适量OCT包埋剂，迅速放入-80℃冰箱冷冻或液氮中骤冷。组织冻硬后，使用冰冻切片机在-20℃至-15℃条件下切片，厚度控制在4-6μm，切片贴附于经APES或多聚赖氨酸处理的载玻片上，室温短暂晾干（约30秒至1分钟，以玻片无明显水分为宜）。

（二）固定液配制

实验所用六种固定液均为实验室常用类型，按常规方法配制：

1.10%中性缓冲福尔马林（NBF）：取甲醛溶液与中性磷酸盐缓冲液按比例混合。

2.4%多聚甲醛（PFA）：称取多聚甲醛粉末溶于磷酸盐缓冲液，加热搅拌至完全溶解。

3.无水乙醇：分析纯无水乙醇。

4.95%乙醇：分析纯乙醇与蒸馏水按比例混合。

5.甲醇：分析纯甲醇。

6.丙酮：分析纯丙酮。

（三）固定与染色流程

将贴有组织切片的载玻片分别浸入上述六种固定液中，固