36招解决流程常见难题攻略.pptVIP

过程中常见问题及处理方法;过程中常见问题及处理方法;c检测磷酸化抗体时，不能使用酪蛋白/脱脂奶粉作为封闭剂

电极不平衡或者加样位置偏斜

尽可能去除核酸，多糖，脂类等干扰分子（通过加入核酸酶或采用不同提取方略）

封闭时使用温和的去污剂，如TWEEN20

可能是因为装置不合适，尤其可能是凝胶和玻璃挡板底部有气泡，或者两边聚合不完全

——更换合适的封闭剂（脱脂奶粉，BSA，血清等）

更换封闭剂（常用的脱脂奶、BSA、血清或明胶）

目标蛋白的表示特性分析

过程中常见问题及处理方法

Westernblot成果曝光问题

a洗膜要注意尽可能地将一抗二抗洗净，有利于降低背景；

可能是因为装置不合适，尤其可能是凝胶和玻璃挡板底部有气泡，或者两边聚合不完全

转膜之前将海绵、胶、膜都用预冷的转移液浸泡20min；

——增长洗涤次数，增长洗膜次数

凝胶若是没在预冷的转膜buffer中浸泡，就会在转膜过程中出现凝胶皱缩，造成出现转移条带变形;;;;;;a脱脂奶粉不能与生物素化或伴刀豆蛋白标识的抗体一起使用，因为脱脂奶粉含有糖蛋白和生物素

——设置二抗对照(不加一抗),降低二抗浓度

转膜之前将海绵、胶、膜都用预冷的转移液浸泡20min；

c膜次序：阴极碳板+海绵+三滤+胶+膜+三滤+海绵+阳极碳板，不能放反

2、一抗或/和二抗浓度低

它是分子生物学、生物化学和免疫遗