传染性犬肝炎病毒实时荧光定量 PCR 检测方法.pdfVIP

GB/TXXXXX—XXXX

附录A

（规范性）

传染性犬肝炎病毒实时荧光定量PCR检测方法

A.1样本的采集及处理

采样过程中样本不应交叉污染，采样及样本前处理过程中须戴一次性手套。

采集少量新鲜犬粪便，加入适量无菌磷酸盐缓冲液（PBS）或生理盐水，充分研磨匀浆，离心取上

清至另一无菌离心管中，编号备用。

细胞培养物，可直接取待测细胞培养物于无菌离心管中，编号备用。

A.2样本的运输和存放

采集或处理的样本在2～8℃条件下保存应不超过24h，若需长期保存，应置于-70℃以下冰箱，

但避免反复冻融（冻融不超过3次，长期保存不超过2年）。

A.3样本DNA的提取

参照核酸提取试剂盒说明书进行阳性对照、阴性对照和样本DNA的提取。样本处理应在生物安全

柜中进行，并避免气溶胶污染。提取后的DNA宜尽快进行下一步PCR反应，若暂时不能进行下一步，

应于-70℃保存备用。

A.4实时荧光定量PCR检测

A.4.1实时荧光定量PCR反应体系

实时荧光定量PC