志贺菌实时荧光 PCR 检测方法.pdfVIP

GB/TXXXXX—XXXX

附录B

（规范性）

志贺菌实时荧光PCR检测方法

B.1材料和试剂

按照6.2进行材料和试剂的准备。

B.2检测方法

B.2.1标本中细菌基因组DNA核酸制备及保存

使用8.2前增菌液，按照核酸提取技术方法的要求或商品化DNA提取试剂盒的要求进行核酸提

取。制备的DNA核酸若不能及时检测，应存放于-20℃以下保存，并尽快完成检测。

B.2.2对照设置

检测过程应设置阳性对照、阴性对照和空白对照。

阳性对照：为扩增片段的阳性克隆分子DNA或标准菌株DNA；

阴性对照：为大肠埃希氏菌标准菌株DNA；

空白对照：为无核酸酶水。

B.2.3PCR反应体系

根据表B.1表在冰上配制反应体系。

表B.1实时荧光PCR反应体系配制表

反应组分用量/μL终浓度